多氯联苯(Aroclor 1254)对雄性小鼠胰腺外分泌部的毒性效应与机制研究

摘要

多氯联苯(PolychlorinatedBiphenyls，PCBs)是首批列入斯德哥尔摩公约的持久性有机污染物之一，其引起的环境问题已受到极大关注。虽然有研究表明持久性有机污染物与糖尿病和胰腺癌等胰腺疾病有关，但关于PCBs对胰腺毒性效应的机制研究仍然缺乏。本研究以C57BL/6品系青春期雄性小鼠为研究对象，以商品化的Arocolr1254为PCBs代表，研究环境水平的PCBs暴露对胰腺外分泌部的毒性影响。实验采用浓度分别为0.5、5、50和500μg/kg的Aroclor1254，通过灌胃法对小鼠进行染毒，每三天灌胃一次，暴露持续50天。取得胰腺样品后采用TUNEL方法和Westernblot等方法对小鼠胰腺的相关指标进行检测。主要研究结果如下:
　　 1、Aroclor1254暴露小鼠50天后，TUNEL法检测小鼠胰腺外分泌部的细胞凋亡率显示暴露组细胞凋亡水平没有显著变化，与细胞凋亡紧密相关的P53、PUMA、Bcl2、BclXL和BAX蛋白表达水平都没有显著性变化，这些结果共同表明胰腺损伤后细胞凋亡水平仍然维持稳定。Westernblot检测结果显示ERK1/2、P90RSK1、Bad蛋白表达水平均没有显著变化而磷酸化的ERK1/2、P90RSK1、Bad的蛋白表达水平在暴露组均有显著性上升，并存在浓度依赖效应，表明Aroclor1254可能是通过激活ERK1/2-P90RSK1-Bad信号通路来产生抗凋亡效应。实验结果显示MEK1/2蛋白表达水平没有显著性变化，而磷酸化MEK1/2蛋白表达水平在暴露组有逐渐下降趋势但没有显著性变化，这提示MEK1/2磷酸化可能受到ERK1/2-P90RSK1-Bad信号通路的负反馈调节。Elk1和MNK1及磷酸化的Elk1和MNK1蛋白表达水平均没有显著性变化，表明这些蛋白没有受到上游蛋白ERK1/2磷酸化水平变化的影响，可能与胰腺损伤没有直接关联。
　　 2、Westernblot检测结果显示ERβ和AR均没有显著性变化，结合前期实验中ERα表达水平没有显著变化，表明PCBs对胰腺的毒性作用没有表现为雌激素效应和雄激素效应。
　　 3、TNFα蛋白在暴露组有1.2倍左右的上调表达，虽然没有显著性差异，仍可推测更长时间的毒物暴露很可能能够引起TNFα的高表达并发挥相应功能。Mbd1在500μg/kg浓度组蛋白水平虽有下降（为对照组0.87倍）但是没有显著性差异，Kras蛋白表达水平暴露组中仅有轻微上调但没有明显变化，这些结果与前期实验中RNA表达水平变化趋势不同，提示了在Mbd1和Kras的转录和翻译过程中可能存在更复杂的调控机制。

目录

声明

摘要

前言

一、多氯联苯的理化性质和来源

二、多氯联苯的污染现状

三、多氯联苯的生物毒性效应

四，污染物对胰腺的毒性影响

五、研究的主要内容、目的和意义

材料与方法

一、实验动物

二、仪器与试剂

1．主要仪器

2．主要试剂

三、实验动物处理

四、取样及样品处理

五、TUNEL细胞凋亡检测

六、western blot分析

1．蛋白提取及含量测定

2．SOS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与Western blot分析

七、数据统计与处理

结果与分析

一、TUNEL检测小鼠胰腺外分泌部细胞凋亡情况

二、Aroclor 1254暴露对小鼠胰腺部分蛋白表达水平的影响

讨论

一、Aroelor 1254暴露对雄性小鼠胰腺外分泌部细胞凋亡的影响

二、Arocior 1254暴露对胰腺部分蛋白表达水平的影响

1．Elk1和MNK1

2．AKT

3．ERβ和AR

4．TNFα

5．Kras

6．Mbd1

结论与展望

一、结论

二、展望

参考文献

致谢