不同浓度异氟醚预处理的脑保护效应及其KATP通道在其诱导脑保护中的作用

摘要

本文主要从以下几方面进行了论述：
　　第一部分 不同浓度异氟烷预处理对脑缺血再灌注损伤的保护效应
　　目的：通过采用不同浓度的异氟烷预处理，观察沙土鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经细胞凋亡以及凋亡相关调控基因Bcl-2、Bax表达的影响，探讨不同浓度异氟烷预处理的脑保护效应。
　　方法：健康蒙古沙土鼠60只，随机分成6组(n=10)，分别为正常对照组（A组），仅分离颈总动脉而未予夹闭;缺血再灌注损伤组（B组），夹闭双侧颈总动脉10min后再开放;1.0％ISO预处理组（C组）;1.5％IS0预处理组（D组）;2.0％ISO预处理组（E组）;2.5％ISO预处理组（F组）。异氟烷预处理组分别吸入浓度为1.0％、1.5％、2.0％、2.5％的异氟烷，每天1h，连续5天。最后一次预处理24h后行缺血再灌注，再灌注48h后取脑组织常规HE染色观察沙土鼠海马中神经系统损伤，同时应用免疫组织化学染色检测Bcl-2、Bax在沙土鼠海马神经细胞中表达，应用TUNEL法检测沙土鼠海马中神经细胞的凋亡。
　　结果：1.HE染色观察发现:A组脑组织切片未见明显海马组织损伤; B组海马组织损伤明显，显示颗粒层细胞明显水肿和空泡变性，神经细胞坏死，血管明显充血并出血;与B组及多组间相比，C组损伤程度与B组相似(P＞0.05)，D、E、F组损伤的程度依次减轻(P＜0.05)。
　　2.Bcl-2:免疫组化检测显示A组有少量阳性表达;与A组相比，B组差异无统计学意义(P＞0.05);与B组及多组间相比，C组阳性表达与B组相似(P＞0.05)，D、E、F组Bc1-2的阳性表达逐渐增高(P＜0.05)，其中F组阳性表达最高。
　　3.Bax:免疫组化检测显示A组未检测到明显的Bax阳性神经元;B组Bax的阳性表达明显增高，与B组及多组间相比，C组阳性表达与B组相似(P＞0.05)，D、E和F三组的阳性表达明显降低(P＜0.05)，其中在E组Bax的阳性表达最低。
　　4.TUNEL法细胞凋亡检测:A组未见明显的神经细胞凋亡，B组神经细胞凋亡阳性表达显著增高;与B组及多组间相比，C组的细胞凋亡阳性表达率与B组相似(P＞0.05)，D、E和F三组细胞凋亡阳性表达率明显降低(P＜0.05)，其中F组神经细胞凋亡的阳性表达率最低。
　　结论：1.异氟烷预处理通过上调Bcl-2、下调Bax的表达抑制细胞凋亡，具有很好的的脑保护效应。
　　2.异氟烷预处理需达到一定浓度才能诱导脑缺血耐受。
　　3.异氟烷预处理的脑保护效应存在剂量-效应关系，推测2.5％异氟烷预处理脑保护效果最好。
　　第二部分 ATP敏感性钾通道在异氟烷预处理诱导脑保护中的作用
　　目的：通过采用不同剂量的K+通道阻滞剂5-羟葵酸（5-hydroxydecanoate5-HD），观察ATP敏感性钾通道在异氟烷预处理诱导脑保护中的作用。
　　方法：健康蒙古沙土鼠60只，随机分成6组(n=10)，A组:为正常对照组，仅分离颈总动脉而未予夹闭;B组:缺血再灌注损伤组，夹闭双侧颈总动脉10min后再开放;C组:2.0％ISO预处理组;D组:2.0％ISO预处理+5-HD5mg/kg;E组:2.0％ISO预处理组+5-HD10mg/kg;F组:2.0％ISO预处理组+5-HD15mg/kg。A、B组处理方法同实验的第一部分，C组吸入2.0％的异氟烷，每天1h，连续5天。最后一次预处理完毕24h后行缺血再灌注，D、E、F组在缺血前30min分别腹腔注射不同剂量的5-HD，然后方法同C组。再灌注48h后取脑组织常规HE观察沙土鼠海马中神经系统损伤，同时应用免疫组织化学染色检测Bcl-2、Bax在沙土鼠海马神经细胞中表达，应用TUNEL法检测沙土鼠海马中神经细胞的凋亡。
　　结果：1.HE染色发现:A组脑组织切片未见明显海马组织损伤;B组脑组织严重损伤，海马组织中显示海马颗粒层细胞明显水肿和空泡变性，神经细胞坏死，血管明显充血并出血;与B组相比，C组织损伤程度明显减轻(P＜0.05)，与C组相比及多组间比较，D组损伤程度与C组相似(P＞0.05)，E、F组损伤的程度依次加重(P＜0.05)。
　　2.Bcl-2:免疫组化检测显示A组有少量抗凋亡基因阳性表达，A、B两组的阳性表达无明显差异(P＞0.05);与B组相比，C组阳性表达明显增加(P＜0.05)，与C组及多组间比较，D组与C组阳性表达无显著差异(P＞0.05)，E、F组Bcl-2的阳性表达逐渐增高(P＜0.05)。
　　3.Bax:免疫组化检测显示A组未检测到明显的Bax阳性神经元;B组有明显的阳性神经元表达，与B组相比，C组阳性表达明显减少(P＜0.05)，与C组及多组间比较，D组阳性表达与其相似(P＞0.05)，E和F组的阳性表达逐渐增加(P＜0.05)。
　　4.TUNEL法检测细胞凋亡:A组未检测到明显的Bax阳性神经元;B组有明显的阳性神经元表达，与B组相比，C组阳性表达明显减少(P＜0.05)，与C组及多组间比较，D组阳性表达与其相似(P＞0.05)，E和F组的阳性表达逐渐增加(P＜0.05)。
　　结论：1.2.0％异氟烷预处理有很好的脑保护效应2.ATP敏感性钾通道在异氟烷预处理脑保护效应中起着重要的作用，是保护作用的重要机制。3.随着5-HD剂量加大，异氟烷预处理的脑保护作用减弱。

目录

前言

第一部分 不同浓度异氟烷预处理对脑缺血再灌注损伤的保护效应

摘要

材料和方法

结果

讨论

结论

第二部分 ATP敏感性钾通道在异氟烷预处理诱导脑保护中的作用

摘要

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

缩略词

声明

综述 麻醉药的脑保护作用的研究