目的：探讨利用胚胎组织进行蚋类细胞原代培养，进行传代，确定适宜的传代条件，并对传代细胞进行鉴定。建立快速、高效、重复性强的建立蚋类细胞系的技术和方法。 方法：采用组织块培养法，对蚋卵（胚胎）组织进行原代培养、传代培养和传代细胞的鉴定。主要从以下几个方面研究：培养基筛选，以改良型Shields and Sang M3培养基作为基础培养基，水解乳蛋白为培养基添加物。部分原代培养的培养物在换液时加入条件培养基培养。传代条件及方法的摸索：通过对传代的时机与密度、悬浮细胞的方法、换液量来筛选适宜的传代条件及方法。原代及传代培养的维持、观察和记录，定期对原代及传代培养细胞换液。每日对培养物观察、记录及拍照，进行比较、分析和总结。传代培养细胞来源的初步鉴定，包括：DNA分类鉴定，PCR扩增、克隆并测定原代及传代培养细胞的rDNA-ITS区序列，与其它已知蚋种的ITS序列一起，用ClustalX及MEGA4.0等软件构建蚋类ITS区序列系统发育树，鉴定种属来源；选取处于分裂期的传代培养细胞，制作中期染色体标本，进行核型分析。 结果：本研究在借鉴前人的基础上，对蚋（卵）胚胎组织原代培养条件进行优化，初步确定蚋卵（胚胎）细胞的原代培养的适宜培养基为改良型M3培养基并添加一定浓度的水解乳蛋白。在培养基中添加20％特级胎牛血清可有效维持细胞生长、增殖，利于细胞贴壁生长。在换液时加入条件培养基，细胞长势较好。初步确定传代的时机为刚刚铺满培养皿；传代方法为机械吹打法。胚胎组织块原代培养过程中观察到多种组织及细胞，而传代时多为圆形细胞和短梭形细胞，并且观察到细胞的有丝分裂现象，对它们进行记录、拍照及分析。将传代培养两代的细胞提取基因组DNA,进行rDNA-ITS序列分子分类鉴定，确定培养的细胞来自五条蚋。制备中期染色体标本，可观察到染色体，说明细胞处于分裂期。 结论：本研究以贵阳市乌当区蚋卵（胚胎）组织为材料，确定了蚋类胚胎组织原代及传代培养的基本条件和方法，记录了蚋科原代及传代初期细胞和组织的形态及生长特征。为下一步蚋类细胞系的建立提供了可靠的方法。
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