Sorafenib通过下调乳腺癌扩增因子1(AIB1)蛋白表达促进肝细胞癌细胞凋亡

摘要

Sorafenib是一种口服的多激酶抑制剂，它给临床上治疗晚期肝细胞癌领域带来了主要的突破性进展。然而在肝细胞癌中，Sorafenib发挥其抗肿瘤效应的分子机制并不是十分清楚。在肝细胞癌组织中AIB1被发现频繁的高表达，并且过表达的AIB1可以促进肝细胞癌的发展进程。在这里，我们研究调查了在肝细胞癌中Sorafenib对AIB1蛋白表达的影响以及调控的分子机制;与此同时我们也研究了AIB1在Sorafenib发挥抗肿瘤效应中所介导的作用。
　　研究表明在肝细胞癌细胞系中Sorafenib可以剂量和时间依赖式的抑制AIB1蛋白的表达。进一步研究结果显示，Sorafenib并不能减少AIB1 mRNA表达水平，也不能加速AIB1蛋白的降解，但却可以显著的抑制AIB1蛋白质的翻译过程。与此同时我们的研究也表明Sorafenib对AIB1蛋白质翻译的抑制至少部分是通过其对eIF4E和mTOR/p70S6K/RP-S6信号通路抑制来实现的。在肝细胞癌细胞中过表达AIB1可以显著减少Sorafenib所诱导的细胞凋亡;而下调AIB1则可以促进Sorafenib所诱导的细胞凋亡。这说明Sorafenib诱导的AIB1蛋白下调可能参与到Sorafenib的促凋亡作用中。另外，我们的研究同时表明AIB1可以通过影响Sorafenib所诱导的活性氧产生进而对Sorafenib的促凋亡作用进行调控。在裸鼠成瘤模型中研究表明，在肝细胞癌肿瘤组织中Sorafenib仍然可以显著抑制AIB1蛋白表达，并且下调AIB1可以显著的增加肿瘤对Sorafenib的敏感性。
　　总之，我们的研究表明在肝细胞癌中AIB1是Sorafenib发挥抗肿瘤作用的下游介导者。我们的工作将为临床上肝细胞癌的个体化治疗和药物合并治疗提供重要的理论依据。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)

1．1．1 肝细胞癌的流行病学特征

1．1．2 肝细胞癌的发生

1．2．索拉菲尼(Sorafenib)

1．2．1 Sorafenib在肝细胞癌患者中的临床三期试验

1．2．2 Sorafenib的抗肿瘤效应和作用的分子机制

1．2．3 肝细胞癌中Sorafenib治疗拮抗的作用机制

1．3 乳腺癌扩增因子1(ampli6ed in breast cancer 1，AIB1)

1．3．1 AIB1的发现

1．3．2 AIB1的分子结构与功能

1．3．3 AIB1基因表达

1．3．4 AIB1生物学功能

1．4．立题背景

第二章 材料和方法

2．1 材料

2．1．1 菌株，细胞与小鼠

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器

2．2 方法

2．2．1 基因克隆相关实验

2．2．2 RNA提取，RNA逆转录PCR和Real-time PCR

2．2．3 Western Blot

2．2．4 细胞培养

2．2．5 细胞转染和稳定细胞系的建立

2．2．6 MTT方法测定药物对细胞的毒性

2．2．7 细胞死亡的测定

2．2．8 TUNEL方法检测细胞凋亡

2．2．9 细胞活性氧(ROS)检测

2．2．10 多聚核糖体mRNA模式分析(Polysome pmnle analysis)

2．2．11 裸鼠成瘤模型

第三章 结果与分析

3．1 在肝细胞癌细胞系中，Somfenib下调AIB1蛋白表达

3．2 在肝细胞癌细胞系中，Sorafenib抑制AIB1蛋白质的翻译

3．3 Sorafenib可能通过抑制eIF4E和mTOR／p70S6K／RP-S6信号通路下调AIB1蛋白质的合成

3．4 在肝细胞癌细胞系中，过表达AIB1显著减少Sorafenib所诱导的细胞凋亡

3．5 在肝细胞癌细胞中，下调AIB1显著促进Sorafenib所诱导的细胞凋亡

3．6 AIB1通过减少Sorafenib所诱导的活性氧水平抑制肝细胞癌细胞的死亡

3．7 p-Akt，Bcl-2以及Mcl-1信号通路在AIB1调节的Sorafenib诱导细胞凋亡中的作用

3．8 肝细胞癌的裸鼠成瘤模型中，下调AIB1促进sorafenib的抗肿瘤效应

第四章 讨论

参考文献

图表索引

缩略语及中英文对照

致谢