RNA螺旋酶DHX32对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要

RNA螺旋酶在RNA加工过程中发挥重要作用，能够利用水解NTP产生的能量参与前mRNA剪接、翻译起始、mRNA转运、核蛋白体生成、RNA降解以及线粒体和细胞核内RNA转录后加工等生物学过程。根据RNA螺旋酶结构域基序氨基酸残基序列的不同，RNA螺旋酶分为DHX和DDX两个家族。已有研究表明多种RNA螺旋酶在肿瘤中表达失调，部分RNA螺旋酶参与细胞分化、细胞周期、细胞凋亡、癌基因表达和肿瘤耐药基因表达的调控。DHX32是一种新的RNA螺旋酶，属于DHX家族，在急性淋巴细胞白血病中低表达。先前我们的研究首次报道了DHX32基因在结直肠癌组织中高表达，并且与结直肠癌的发生部位、组织学分级、癌栓形成、淋巴结转移和DUKES分期密切相关。然而，DHX32在结直肠癌发生发展中的生物学功能和分子机制并不清楚。
　　在本研究中，我们发现DHX32在结直肠癌细胞株中高表达。为了进一步研究DHX32在结直肠癌发生发展中的作用，我们分别构建了DHX32沉默和DHX32过表达的结直肠癌细胞株来进行细胞功能方面的研究。首先我们用了CCK-8，BrdU和细胞克隆形成实验三种实验方法来研究DHX32在结直肠癌细胞SW480和HCT-8细胞增殖方面的影响。结果显示DHX32沉默后抑制了SW480和HCT-8细胞的增殖和克隆形成能力。接着我们又用了transwell的方法研究了DHX32对SW480和HCT-8细胞迁移和侵袭的影响。结果显示，与对照组相比DHX32沉默后SW480和HCT-8的细胞迁移和侵袭能力明显降低。我们又做了细胞划痕愈合实验进一步验证DHX32对SW480细胞迁移能力的影响，结果正如我们预想的那样，DHX32沉默后SW480的细胞愈合能力明显下降。为了进一步明确我们的实验结果的可靠性，我们成功构建了SW480细胞的DHX32过表达稳转细胞株，用该细胞株做了细胞增殖，迁移和侵袭实验。结果显示DHX32过表达之后促进了SW480细胞的增殖、迁移和侵袭，与上述沉默细胞株所得结果相吻合。最后，我们初步探讨了可能的分子机制。我们的研究结果发现，将DHX32沉默之后，磷酸化Akt的水平明显下降。而先前的研究表明，Akt信号通路在结直肠癌的增殖、迁移、侵袭和凋亡方面有着重要作用。因此，DHX32可能是通过Akt信号通路在结直肠癌发生发展中起作用。具体的分子机制需要进一步探讨。总之，我们的研究结果表明DHX32在结肠癌中可能是一个新的癌基因。

目录

声明

摘要

英文名词及缩略词表

第一章 前言

1．结直肠癌简介

2．RNA螺旋酶DHX32概述

3． Bcl-2家族成员

4．Akt信号通路

5．研究的内容与意义

第二章 材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

第三章 实验结果

1．DHX32在结直肠癌细胞株中表达上调

2．DHX32沉默和过表达稳转细胞株的构建及效果鉴定

3．DHX32沉默后抑制SW480和HCT-8的细胞增殖

4．DHX32沉默后抑制SW480和HCT-8的细胞侵袭

5．DHX32沉默后抑制SW480和HCT-8的细胞迁移

6．DHX32过表达后促进SW480细胞增殖

7．DHX32过表达后促进SW480细胞迁移和侵袭

8．DHX32的下调表达导致了凋亡相关蛋白表达的改变并且抑制了Akt信号通路

第四章 讨论

1．DHX32在结直肠癌中的表达情况

2．DHX32在结直肠癌细胞增殖方面的作用

3．DHX32在结直肠癌细胞侵袭方面的作用

4．DHX32在结直肠癌细胞迁移方面的作用

5．DHX32在结直肠癌发生发展中的可能的分子机制

结论

参考文献

致谢

科研成果