诱导多能干细胞来源的间充质干细胞通过影响T细胞分化缓解克罗恩病

摘要

目的：目前，有许多研究表明，无论是脂肪来源还是骨髓来源的间充质干细胞都对克罗恩病和溃疡性结肠病实验室模型有益。甚至有些临床的一期实验，已经证明了间充质干细胞可以缓解炎症性肠病的临床症状和组织病理学损伤。然而，限制间充质干细胞临床研究与应用的最主要原因就是间充质干细胞在组织中的含量有限，很难得到充足的干细胞，满足临床研究和应用的需求，并且提取细胞的过程也会给病人或者细胞捐献者带来极大的痛苦。在此，研究目的主要是探讨另一种新型来源的间充质干细胞即诱导多能干细胞来源的间充质干细胞(iPSC-MSCs)是否能够缓解甚至是治疗克罗恩病，并且尝试发现iPSC-MSCs发挥免疫调节作用的机制。
　　方法：使用三硝基苯磺酸(TNBS)，直肠灌注诱导小鼠的克罗恩病模型，腹腔注射iPSC-MSCs，通过测定小鼠的体重变化、观察组织病理学变化来评估iPSC-MSCs是否发挥了治疗作用，通过流式细胞术、流式液相多重蛋白定量技术(CBA)、蛋白印记技术、酶联免疫吸附实验(ELISA)等实验技术探讨iPSC-MSCs发挥免疫调节作用的机制。
　　结果：iPSC-MSCs可以缓解克罗恩病引起的小鼠体重下降;病理切片可以明显看到iPSC-MSCs减少粘膜炎性细胞的浸润;iPSC-MSCs和脾细胞共培养，iPSC-MSCs可以抑制ConA刺激下脾细胞的增殖和炎性细胞因子的分泌。
　　结论：iPSC-MSCs可以缓解小鼠克罗恩病模型的炎症性反应，产生这种作用的机制是iPSC-MSCs可以影响T淋巴细胞的分化方向，抑制其向Th1、Th17分化，促进其向免疫调节性的T细胞分化。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 间充质干细胞的相关研究

1．1．1 间充质干细胞研究的发展、定义和特点

1．1．2 间充质干细胞的来源与分布情况

1．1．3 间充质干细胞形态特征

1．1．4 间充质千细胞增值能力和多向分化潜能

1．1．5 间充质干细胞的细胞表面标志

1．1．6 间充质干细胞的免疫学特性

1．1．7 间充质干细胞发挥免疫作用的机制

1．1．8 间充质干细胞的免疫学研究新进展

1．2 克罗恩病的定义、临床表现及治疗方法的研究

1．2．1 炎症性肠病的分类

1．2．2 炎症性肠病的发病机制

1．2．3 克罗恩病临床治疗进展

1．3 间充质干细胞用于克罗思病的治疗

第二章 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 试验用细胞

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要仪器

2．2 实验方法

2．2．1 间充质干细胞的培养和流式鉴定

2．2．2 动物模型的准备与实验分组

2．2．3 小鼠脾脏细胞的分离培养与增殖检测

2．2．5 流式检测

2．2．6 组织病理学检测

2．2．7 流式液相多重蛋白定量技术(Cytometric Bead Array，CBA)

2．2．7 iPsC-MSCs的分组刺激刺激与蛋白印记技术

2．2．8 iPSC-MSCs和脾细胞共培养

2．2．9 酶联免疫吸附实验(ELISA)

2．2．10 统计学分析

第三章 结果与讨论

3．1 结果

3．1．1 iPSC-MSC的免疫表型

3．1．2 iPSC-MSCs可以缓解TNBS诱导的炎症性肠病

3．1．3 iPSC-MSCs抑制T淋巴细胞向Th1／Th17方向分化，促进其向调节性T细胞分化

3．1．4 iPSC-MSCs和炎症性细胞的相互作用

3．2 讨论

第四章 结论与展望

4．1 结论

4．2 展望

参考文献

附录

致谢