苏木体外抗MRSA活性成分研究及细胞毒性评价

摘要

目的：
　　1.提取分离豆科云实属植物苏木Caesalpinia sappan L.(Leguminosae)的有效成分。
　　2.探讨单体化合物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抗菌活性，以及活性单体与临床常用的抗菌药物联合用药后抗MRSA的作用效果。
　　3.研究单体化合物对人肝细胞株HL-7702和肺癌细胞株A549的细胞毒性作用。
　　方法：
　　1.结合细菌药物敏感性试验，采用萃取、柱层析分离等方法，对苏木乙酸乙酯部位的分段产物进行生物活性跟踪筛选，对具有活性的片段进一步分离纯化得到单体化合物，结合现代波谱分析技术和理化方法鉴定其结构。
　　2.对分离得到的5个单体化合物进行抗 MRSA活性研究，采用微量稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。根据测定结果，采用琼脂纸片扩散法筛选与单体化合物有联合作用的抗生素，进一步采用微量棋盘稀释法和时间-杀菌曲线法测定化合物与所筛选出的抗生素的联合作用效果。
　　3.采用MTS法，通过测定吸光度(OD)值来评价化合物对人肝细胞株HL-7702和肺癌细胞株A549的细胞毒性作用。
　　结果：
　　1.从该植物中分离得到5个单体化合物：(1) Brazilin;(2)3-deoxysappanone B;(3) Potosappanin B;(4) Brazilein;(5) Potosappanin A。
　　2.药物敏感性试验结果显示，MRSA菌株对β-内酰胺类、环丙沙星类等多种抗生素均耐药，对万古霉素、利萘唑胺敏感。微量稀释法结果显示，化合物1对MRSA作用较强，MIC范围为16~32μg/mL，MBC范围为32~128μg/mL。另外4个化合物与化合物1相比，作用稍弱，MIC范围为32~512μg/mL，MBC范围为64~512μg/mL。
　　3.受试药物与临床常用抗生素联合用药的实验结果显示：化合物1与4种常用氨基糖苷类抗生素联合时均有明显协同效果（FICI≤0.5），化合物4与阿奇霉素联合呈现协同作用，化合物2-5与庆大霉素或阿米卡星联合使用呈现协同或相加作用，与青霉素类、头孢类抗生素联合时多为相加(0.5＜FICI≤1.0)和无关作用(1.0＜FICI≤2.0)，少见协同作用。随机抽取的1株MRSA144绘制时间-杀菌曲线显示，合用时log10CFU/mL比化合物或抗生素单用时明显下降。
　　4.MTS法测定化合物细胞毒实验结果显示，化合物1、3、4、5对人肝细胞株 HL-7702和肺癌细胞株 A549的细胞增殖均有一定的抑制作用，且呈浓度依赖关系。
　　结论：苏木中分离得到5个化合物，不仅有较好的抗MRSA活性，而且与部分常用抗生素联合使用具有增强抗MRSA的作用。

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封面

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中文摘要

前言

第一部分 苏木抗菌活性成分的跟踪分离

1实验仪器与材料

2 实验方法

3 实验结果

4 化合物的波谱鉴定及理化性质

第二部分 苏木化学成分抗MRSA活性研究

第一节 体外抗菌活性研究

1实验仪器与材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

第二节 苏木成分与抗生素的联合抗菌研究

1 实验仪器与材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

第三部分 苏木化学成分细胞毒性研究

1实验仪器与材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

工作小结

参考文献

英文摘要

致谢

缩略词表

声明

附 综述: 中草药成分联合抗生素抗MRSA作用的研究进展