登革2型病毒NGC株对小鼠髓源性DCTLR4、TLR7表达影响的研究

摘要

目的：通过登革2型病毒（DEN2）NGC株感染小鼠髓源性树突状细胞（DC），观察DEN2感染DC后CD11c、CD86、I-A/I-E、TLR4和TLR7的表达，为研究DEN2感染的发病机制提供科学依据。
　　方法：BALB/c乳鼠脑内接种及C6/36细胞增殖病毒，RT-PCR鉴定病毒核酸,50％组织细胞感染量（TCID50）测定病毒毒力；rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导鼠源性DC，鉴定细胞及其纯度；直接免疫荧光法观察DEN2感染DC;流式细胞术检测DC细胞被DEN2感染后膜表面分子CD11c、CD86、MHC-II类分子表达的动态变化；实时荧光定量PCR动态检测DEN2NGC株感染DC细胞后DEN2 mRNA、TLR4和TLR7 mRNA水平表达的变化。
　　结果：
　　1、DEN2对C6/36细胞的TCID50为105.8。
　　2、用IL-4和GM-CSF诱导C57BL/6小鼠骨髓来源细胞，5d后通过流式细胞术鉴定其DC的纯度达到70%。
　　3、DEN2能够感染小鼠骨髓来源DC。
　　4、与阴性对照组相比，接种病毒组（1×104TCID50）的DCs膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率差异无统计学意义（P>0.05）。与阴性对照组相比，接种病毒组（1×105TCID50）的DCs膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率差异均有统计学意义（P＜0.05），但各组其百分率的变化并未随着时间的延长，呈现出明显的上升或下降的趋势；随着病毒剂量的增加，DCs膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率呈现出上升的趋势。
　　5、与阴性对照组比较，Real-time PCR证明各组病毒mRNA水平随着病毒剂量的增大而逐渐升高。
　　6、与阴性对照组比较，Real-time PCR检测各组被DEN2感染的DC TLR4、TLR7 mRNA随着病毒剂量的增加，呈现下调的趋势。
　　结论：
　　1、DEN2可促进DC的成熟。
　　2、DEN2感染DC后，TLR4、TLR7 mRNA水平随病毒mRNA水平的增加而降低，提示TLR4、TLR7与病毒感染密切相关，在DEN致病中发挥了一定的作用和功能。

目录

封面

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中文摘要

1. 前言

2. 实验材料

3.方法

4.结果

附：流式细胞仪检测骨髓来源细胞膜表面分子表达的流式细胞分析图（部分）

5.讨论

参考文献

英文摘要

致谢

缩略词表

声明

附 综述: Toll样受体4、7与病毒感染的研究进展