自体富血小板血浆对游离皮瓣移植存活的影响及其作用机制的初步研究

摘要

目的:探讨局部应用PRP对游离皮瓣存活的影响，深入了解自身来源的富血小板血浆(PRP)在皮瓣转移过程中的作用，并初步探讨PRP影响游离皮瓣生长的作用机制，为PRP的实验研究和临床应用提供理论依据。
　　方法:将30只新西兰大白兔编号，用随机数表法随机分为实验组和对照组，每组15只新西兰大白兔。取兔子自身动脉血制备PRP，检测PRP中血小板和生长因子浓度，并计算其浓缩倍数。实验组处理:游离皮瓣基底部涂抹1.0ml的PRP，然后将游离皮瓣原位缝合;对照组处理:游离皮瓣基底部涂抹1.0ml的生理盐水，然后将游离皮瓣原位缝合。分别于术后2d、3d、5d、7d和14 d观察大体成活情况，并取实验兔游离皮瓣组织行组织学观察、皮瓣成活率测定、皮瓣完全愈合时间计算、微血管密度检测和皮瓣合成生长因子基因的mRNA表达量检测，探讨PRP对游离皮瓣存活的影响，以及初步研究其作用机制。
　　结果:①全血血小板浓度（392.77±49.13）×109/L，PRP血小板浓度(2863.00±962.23)×109/L，浓缩7.3倍。②全血VEGF浓度（99.70±0.40）pg/ml，PRP中VEGF浓度（564.30±3.20）pg/ml，浓缩5.6倍;全血TGF-β浓度（273.50±95.20）pg/ml，PRP中TGF-β浓度（1142.70±251.30）pg/ml，浓缩4.1倍。③皮瓣成活率:实验组皮瓣成活率99.96％，对照组皮瓣成活率99.90％，P＞0.05，两组之间没有显著差异。④皮瓣愈合时间:实验组皮瓣愈合时间(5.14±0.23)d，对照组皮瓣愈合时间（7.16±0.23）d，P＜0.05，两组间差异有统计学意义。⑤微血管密度:实验组CD31检测平均微血管密度（10.5±0.8）个/低倍镜，对照组（5.3±0.7）个/低倍镜，P＜0.05，差异有统计学意义;实验组α-SMA检测平均微血管密度（11.6±0.8）个/低倍镜，对照组（5.3±0.5）个/低倍镜，P＜0.05，差异有统计学意义。
　　结论:1.证明了Aghaloo法可制备有效浓度的PRP。2.成功地建立了兔耳游离皮瓣移植动物模型。3.PRP对游离皮瓣成活率没有影响。4.PRP可以有效缩短游离皮瓣愈合时间。5.PRP可以显著地提高游离皮瓣组织微血管密度。6.PRP可以刺激皮瓣组织合成并分泌多种内源性生长因子，且内源性生长因子呈现不同的表达高峰期。

目录

声明

英文缩写一览表

摘要

第一章 前言

第二章 实验材料和实验方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要实验试剂

2．1．3 主要实验仪器

2．2 实验方法

2．2．1 实验分组设计

2．2．2 PRP的制备与活化

2．2．3 游离皮瓣动物模型建立

2．2．4 标本采集与处理

2．3 观察指标与检测方法

2．3．1 全血及PRP血小板浓度检测

2．3．2 ELISA检测生长因子浓度

2．3．3 皮瓣生长大体观察

2．3．4 皮瓣存活率测定

2．3．5 皮瓣完全愈合时间测定

2．3．6 皮瓣标本HE染色

2．3．7 光镜学观察步骤

2．3．8 皮瓣标本免疫荧光染色

2．3．9 微血管密度检测

2．3．10 皮瓣内源性生长因子mRNA从相对表达量

2．4 数据的统计学分析

第三章 实验结果

3．1 全血及PRP血小板浓度

3．2 全血及PRP生长因子浓度

3．3 皮瓣大体情况、皮瓣存活率和皮瓣愈合时间观察

3．3．1 大体观察

3．3．2 皮瓣存活率

3．3．3 皮瓣愈合时间

3．4 组织学观察

3．4．1 组织形态学观察(HE染色×100)

3．4．2 组织结构学观察(HE染色×400)

3．5 微血管密度

3．5．1 CD31免疫荧光

3．5．2 α-SMA免疫荧光

3．6 皮瓣内源性生长因子mRNA相对表达量

第四章 结论

第五章 讨论

参考文献

富血小板血浆对皮瓣移植存活影响的研究进展

研究生期间撰写及发表论文情况

致谢