与WUSCHEL蛋白相互作用的WBP蛋白参与拟南芥茎尖干细胞的维持

摘要

高等植物的地上部分主要来源于茎尖分生组织的干细胞区，拟南芥茎端分生组织的组织中心区表达的WUS(WUSCHEL)蛋白决定其上面临近的中央区域细胞为干细胞，并能够抑制干细胞的分化和维持干细胞的数量。WUS-CLV反馈调节环对于维持干细胞的动态平衡起着重要的作用。拟南芥中能够影响WUS表达的蛋白，也将影响WUS蛋白对干细胞动态平衡的调控过程。
　　本文通过酵母双杂交实验，以WUS蛋白作诱饵蛋白，从拟南芥cDNA文库找到可以与其相互作用的AT1G62970基因编码的WBP蛋白。通过酵母双杂交回复验证实验和双分子荧光互补实验，证明WUS蛋白和WBP蛋白在酵母和植物细胞内存在着相互作用。我们的研究表明WBP蛋白定位于细胞核中，WBP蛋白表达水平降低后，会导致WUS基因转录水平的上调和蛋白表达水平的下调，CL V3基因转录水平和表达水平都发生下调。推测WBP蛋白可能是与WUS蛋白相互作用后来调控WUS蛋白的翻译和WUS蛋白的活性，进而抑制CL V3基因表达，CLV3对WUS抑制作用的减弱又导致WUS转录水平的进一步增强。
　　本研究结果有助于进一步完善WUS维持茎尖干细胞动态平衡的信号调控网络。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1 植物茎尖分生组织

1．1 植物茎尖分生组织的形成

1．2 植物茎尖分生组织的结构

1．3 拟南芥茎尖分生组织维持的分子调控机理

2 DnaJ蛋白

3 AT1G62970基因

4 立题依据

第二章 材料与方法

1 实验材料

1．1 拟南芥

1．2 菌株

1．3 质粒

1．4 主要试剂与试剂盒

1．5 常用培养基和溶液

1．6 引物

1．7 主要仪器

2 实验方法

2．1 拟南芥相关实验操作

2．2 分子生物学实验操作

2．3 GUS染色及石蜡切片

2．4 酵母双杂交相关实验技术

2．5 双分子荧光互补

2．6 蛋白相关实验操作

第三章 结果与分析

1 WBP蛋白与WUS蛋白在酵母中的相互作用

2 WBP蛋白与WUS蛋白在植物细胞中的相互作用

3 WBP蛋白亚细胞定位

4 WBP基因RNA干扰后对拟南芥生长发育的影响

5 AT1G62970对WUSCHEL的调控

第四章 讨论与展望

1 WBP蛋白能够与WUS蛋白相互作用

2 WBP对茎尖分生组织动态平衡的影响

3 WBP在翻译水平调控WUSCHEL

4 展望

参考文献

致谢