PTEN在冈田酸诱导SH-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化中的表达及褪黑素对其作用的研究

摘要

目的：以tau蛋白过度磷酸化为反映AD(Alzheimer'sDisease)发生发展的关键指标，初步探明实验性AD诱导产生过程中的PTEN表达状况及其与tau蛋白过度磷酸化的关系，以深化理解AD的发病机制；探讨褪黑素(melatonin，MLT)抗AD样细胞效应及其与tau蛋白过度磷酸化及PTEN表达的关系，为MLT及其同系物的临床应用提供理论基础。 方法：①采用冈田酸(Okadaicacid,OA)诱导SH-SY5Y细胞，以tau蛋白过度磷酸化和细胞活性的变化为观察指标，建立用于AD研究的细胞模型。②MTT法检测细胞活性。③Westernblot法测定SH-SY5Y细胞Ser396位点磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。④免疫细胞化学法观测SH-SY5Y细胞内tau蛋白样免疫阳性反应物。 结果：①OA孵育SH-SY5Y细胞可显著降低细胞活性，作用随着OA浓度的增高和作用时间的延长而增强；40nmol／LOA作用SH-SY5Y细胞不同时间，可见细胞中Ser396位点磷酸化tau蛋白水平于作用后3h开始升高，6h和12h进一步升高，24h达高峰，随后开始下降，48h的水平仍高于基础值，提示OA可诱导SH-SY5Y细胞活性下降和tau蛋白过度磷酸化。②40nmol／LOA孵育SH-SY5Y细胞，同时观测细胞中Ser396位点磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平随OA作用时间的变化，可见Ser396位点磷酸化tau蛋白水平变化同上，而PTEN蛋白水平于OA作用后6h、12h高于基础水平，24h、48h则低于基础值，提示在OA诱导SH-SYSY细胞tau蛋白过度磷酸化过程中，PTEN表达存在变化。③10lamol／L和100!~mol／LMLT预处理细胞2h，随后加40nmol／LOA孵育细胞24h，可见MLT预处理组细胞活性显著高于OA处理组，Ser396位点磷酸化tau蛋白水平明显低于OA处理组，提示MLT可对抗OA诱导SH-SY5Y细胞活性下降和tau蛋白过度磷酸化。④10gmol／LMLT预处理细胞2h，随后加40nmol／LOA孵育细胞12h，MLT预处理组细胞PTEN蛋白水平与OA处理组相比未见变化：10~tmol／LMLT预处理细胞2h，随后加40nmol／LOA孵育细胞24h，MLT预处理组细胞PTEN蛋白水平明显高于OA处理组，提示MLT对40nmol／LOA作用SH-SY5Y细胞24h所致的PTEN表达减弱可能具有对抗作用。 结论 1．OA可诱导SH-SY5Y细胞活性下降和tau蛋白过度磷酸化，该细胞模型可用于AD研究。 2．在OA诱导SH-SYSY细胞tau蛋白过度磷酸化过程中，PTEN表达存在变化，提示PTEN在实验性AD发生发展中可能存在作用。 3．MLT显著对抗OA诱导SH-SY5Y细胞活性下降和tau蛋白过度磷酸化，抑制tau蛋白过度磷酸化可能是MLT发挥抗AD效应的机制之一。 4．MLT对OA诱导的SH-SY5Y细胞PTEN表达减弱可能具有对抗作用，这与其抑制tau蛋白过度磷酸化可能有关。

目录

英文缩写字表

前言

第一部分PTEN在冈田酸诱导SH-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化中的表达

第二部分褪黑素抗OA诱导的AD样细胞效应

结论

参考文献

附录

致谢

综述阿尔茨海默病中的tau蛋白分子病理变化