南瓜蛋白对B16细胞的增殖抑制及诱导分化作用

摘要

目的：从小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制和诱导分化两方面对南瓜蛋白的抗肿瘤作用进行研究，初步阐明南瓜蛋白抗肿瘤作用的可能机制。为南瓜蛋白及其同类物的抗肿瘤机制提供理论基础，为肿瘤诱导分化疗法提供新线索。 方法：(1)通过MTT法测定不同浓度的南瓜蛋白(分别为1.25mg·L-1、2.5mg·L-1、5.0mg·L-1、10.0mg·L-1、20.0mg·L-1和40.0mg·L-1)作用不同时间(分别为24h、48h和72h)后对体外培养的B16细胞的增殖抑制作用。(2)以小鼠黑色素瘤B16细胞建立C57BL/6J移植瘤模型，观察南瓜蛋白对小鼠移植瘤的抑制作用。小鼠随机分为5组，分别为阴性对照组、南瓜蛋白高剂量组、南瓜蛋白中剂量组、南瓜蛋白低剂量组和CTX组。用药12天后将小鼠处死，剥瘤称重。(3)收集不同浓度南瓜蛋白处理后的B16细胞，用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态，流式细胞术检测细胞周期变化以及酶标仪测定黑色素含量，以形态学、细胞周期及黑色素含量为指标，观察南瓜蛋白对B16细胞的诱导分化作用。 结果：①随着药物浓度及作用时间的增加，南瓜蛋白对体外培养B16细胞的增殖抑制率也随之增加，说明南瓜蛋白对体外培养B16细胞的增殖抑制作用具有明显的剂量依赖性和时间依赖性，其作用48h和72h的IC50分别为9.99mg·L-1和2.07mg·L-1。②南瓜蛋白高、中、低剂量组和CTX组的瘤重都低于阴性对照组，抑瘤率分别为50.39％、33.3％、22.26％和57.25％，差异有显著性(P＜0.05)。③不同浓度的南瓜蛋白处理B16细胞72h后，能使S期细胞明显减少，而G0/1期细胞增多，提示南瓜蛋白可阻止B16细胞由G1期向S期过渡而停滞于G1期，该作用具有剂量依赖性。④南瓜蛋白浓度在1.25mg·L-1以上者细胞形态向正常上皮样细胞分化，生长抑制，增殖缓慢，接触抑制恢复，平铺不重叠，甚至形成网状结构；电镜观察细胞恶性度下降，胞浆内细胞器丰富，黑色素小体明显增多。⑤1.25mg·L-1、2.5mg·L-1、5mg·L-1和10mg·L-1的南瓜蛋白作用72h均使B16细胞黑色素生成能力明显增强，且呈剂量依赖性。 结论：1.南瓜蛋白在体内外对B16细胞均具有明显的抑制作用；2.南瓜蛋白对B16细胞有较强的诱导分化作用；3.诱导分化可能是南瓜蛋白抗肿瘤作用的一个新机制。

目录

英文缩写字表

一、中文摘要

二、英文摘要

三、前言

四、材料和方法

五、结果

六、讨论

七、结论

八、参考文献

九、附录

十、致谢

本课题实验数据一览表

综述 核糖体失活蛋白抗肿瘤作用的研究进展