TGF-β2对体外培养人眼小梁细胞CD44s表达的影响及意义

摘要

探讨体外培养人眼小梁细胞(human trabecular cells，HTCs)的方法，观察其生物学特性，并在此基础上研究人眼小梁细胞是否表达黏附分子CD44<,s>以及转化生长因子-β<,2>(transforming growth factor-β<,2>，TGF-β<,2>)对体外培养人眼小梁细胞CD44<,s>表达的影响及其意义。 采用组织块培养法进行体外人眼小梁细胞的培养，运用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐([3-(4，5-dimethylthiazolz-y1)-2，5-dipheny ltetrazolium bramide]，MTT)比色法，倒置显微镜、透射电镜、免疫细胞化学法等方法观察体外培养的人眼小梁细胞的生物学特性并进行细胞鉴定。(2)采用流式细胞术定量和RT-PCR半定量检测体外培养的人眼小梁细胞是否表达黏附分子CD44<,s>及其表达量。(3)采用流式细胞术定量和RT-PCR半定量检测体外培养的人眼小梁细胞经浓度为00ng/ml(对照组)、40ng/ml、80ng/ml、120ng/ml的TGF-β<,2>处理24小时后，细胞表达黏附分子CD44<,s>的量。 (1)组织块培养10-15天后可见细胞从其边缘向外生长，倒置显微镜下呈梭形、圆形、椭圆形，并有多个突起，电镜下可见表面有较多的微绒毛，细胞间缝隙连接，胞质内见较多次级溶酶体。(2)免疫细胞化学法检测纤维黏连蛋白(fibronectin，VN)、层黏连蛋(Laminin，LN)和神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)染色阳性，传三代细胞均表现为胞浆呈红色。(3)流式细胞术定量检测结果显示体外培养的人眼小梁细胞表达黏附分子CD44<,s>，其平均荧光强度为79.82±21.94；RT-PCR法CD44<,s>/G3PDH像素值比值为0.59±0.76。(4)运用流式细胞术对经浓度为40ng/ml、80ng/ml、120ng/ml的TGF-β<,2>处理的实验组检测，其表达黏附分子CD44<,s>平均荧光强度为56.53±12.74、74.11±9.94及37.54±8.1低于对照组的79.82±21.94，结果经Levene方差齐性检验，由于方差齐性，故采用单因素四水平方差分析各组间差异，LSD法进行两两组间多重比较，其总F值为 12.239，P=0.000<0.001，差异有统计学意义。(5)运用RT-PCR法对经浓度为40ng/ml、 80ng/ml、120ng/ml的TGF-β<,2>处理的实验组检测，其CD44<,s>/G3PDH像素值比值分别为 0.51±0.76、0.30±0.84以及0.06±0.04与对照组0.59±0.76比较，其总F值为135.630， P=0.000<0.001，差异有统计学意义。 (1)掌握体外细胞培养技术和人眼小梁细胞的生长特点、超微结构以及免疫细胞化学染色等特点，能够成功地进行人眼小梁细胞的体外培养及鉴定。(2)体外培养的人眼小梁细胞高表达黏附分子CD44<,s>。(3)转化生长因子-β<,2>能抑制人眼小梁细胞表达黏附分子CD44<,s>，可能是引起小梁细胞丢失、功能异常的原因之一。

目录

论文说明：英文缩写词中文释义表

声明

引言

第一部分人眼小梁细胞的体外培养和鉴定

1、材料

2、方法

3、结果

4、讨论

第二部分体外培养人眼小梁细胞黏附分子CD44s的表达

1、材料

2、方法

3、结果

4、讨论

第三部分TGF-β2对体外培养人眼小梁细胞CD44s表达的影响及意义

1、材料和方法

2、结果

3、讨论

全文结论

参考文献

致谢

综述

附录