HSP27磷酸化在血管平滑肌细胞迁移中的作用

摘要

目的：研究热休克蛋白27(HSP27)磷酸化在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移中的作用及其作用机制。 方法：采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞；用特异性的单克隆Phospho-HSP27抗体的蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSP27的活性；用FITC-鬼笔环肽标记F-actin并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的形态变化；采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验。 结果： 第一部分：AngⅡ和PDGF-BB呈浓度依赖性诱导VSMCs的HSP27磷酸化，使VSMCs内F-actin数量明显增加，纵向平行排列，形成应力纤维丝，并促进细胞迁移。AngⅡ(10<'-7>mol/L)和PDGF-BB(30ng/ml)诱导后VSMCs的HSP27磷酸化水平在30分钟达高峰。AngⅡ和PDGF-BB均能诱导VSMCs的HSP27磷酸化，作用峰值浓度分别为10<'-5>mol/L和100 ng/ml，分别较对照组增高338.9％和159.1％。HSP选择性阻断剂槲皮素以浓度依赖性方式抑制AngⅡ和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化，最大抑制率分别为71.7％和66.7％。100 umol/L槲皮素可阻抑AngⅡ、PDGF-BB刺激VSMCs后产生的应力纤维丝形成，对AngⅡ、PDGF-BB诱导的VSMCs迁移的抑制率分别为55.3％和53.6％。 第二部分：选择性阻断HSP27磷酸化的上游信号转导通路中的P38丝裂原激活蛋白激酶(P38MAPK)、磷脂酰肌醇-3激酶(P13K)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)能有效抑制HSP27的磷酸化水平，并减少VSMCs迁移。P38MAPK选择性抑制剂SB202190、P13K选择性抑制剂LY294002和ERK1/2选择性抑制剂U0126均呈浓度依赖性抑制AngⅡ和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化，对AngⅡ诱导的HSP27磷酸化的最大抑制率分别为87.2％、78.4％和37.3％，对PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化的最大抑制率分别为85.0％、55.3％和41.0％。100umol/L SB202190、30umol/L LY294002和30umol/LU0126均能有效抑制AngⅡ、PDGF-BB刺激VSMCs后产生的应力纤维丝形成，对AngⅡ诱导的VSMCs迁移的抑制率分别为60.1％、71.7％和47.3％，对PDGF-BB诱导的VSMCs迁移的抑制率分别为55.3％、55.6％和38.1％。 第三部分：AT<,1>受体拮抗剂坎地沙坦可以明显抑制AngⅡ诱导的HSP27磷酸化。PDGF受体拮抗剂曲匹地尔能显著抑制PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化。氟伐他汀抑制AngⅡ和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化，并有量效关系，抑制作用在10<'-5>mol/L时最显著，最大抑制率分别为42.1％和58.5％。阿魏酸钠也以剂量依赖性方式抑制AngⅡ和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化，在10<'-4>mol/L时抑制作用最明显，最大抑制率分别为39.0％和56.8％。 结论： 1、HSP27的磷酸化可能介导AngⅡ与PDGF-BB诱导的VSMCs的细胞骨架重建和迁移。 2、P38MAPK和PI3K/AKT是AngⅡ、PDGF-BB诱导HSP27磷酸化和VSMCs迁移的重要途径，ERK1/2部分参与AngⅡ、PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化和VSMCs迁移。 3、氟伐他汀、阿魏酸钠可能通过抑制HSP27磷酸化影响VSMCs的迁移。

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摘要

前言

第一部分HSP27磷酸化在AngⅡ、PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞迁移中的作用

第二部分AngⅡ、PDGF-BB诱导血管平滑肌细胞HSP27磷酸化的上游通路

第三部分不同药物对AngⅡ、PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化的影响

全文总结

参考文献

综述 热休克蛋白27的研究进展

致谢