多种营养素对燃煤型氟中毒雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡干预作用研究

摘要

目的：探讨钙、镁、锌、铜、维生素D与蛋白质对燃煤型氟中毒雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡的干预作用及可能机制。
　　方法:1.将SD雌性大鼠120只随机分为对照组、染氟组、多维元素干预组、多维元素加蛋白干预组，每组30只，自由食用添加钙、镁、铜、锌、维生素D和强化大豆不同配方的织金病区原煤加拌泥煤烘烤的玉米饲料构建动物模型；2.动态观察雌鼠染氟期间牙齿的变化情况；3.采用离子选择电极法、高温灰化-氟离子选择电极法测定雌鼠尿氟、骨氟含量；4.于不同时间段（60d、120d、180d）动情期处死雌鼠，分离卵巢。①采用比色法测定雌鼠新鲜卵巢组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量；②电镜下观察卵巢组织超微结构；③原位末端标记（TUNEL）法检测卵巢颗粒细胞凋亡率；④免疫组化法检测卵巢颗粒细胞凋亡相关因子 Fas、Caspase-3的表达情况。
　　结果：1.成功建立燃煤型氟中毒雌鼠模型和干预模型。2.染氟时间相同的组别，雌鼠卵巢SOD活性为对照组>多维元素加蛋白干预组>多维元素干预组>染氟组（P<0.05），雌鼠卵巢MDA含量为染氟组>多维元素干预组>多维元素加蛋白干预组>对照组（P<0.05）；3.卵巢超微结构显示颗粒细胞凋亡现象：对照组和两干预组未见，染氟组出现，随时间延长，凋亡加重；4.染氟时间相同的组别，雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡率为染氟组>多维元素干预组>多维元素加蛋白干预组>对照组（P<0.05），随时间延长，仅染氟组60d与180d比较有统计学意义（P<0.05）；5.染氟时间相同的组别，雌鼠卵巢颗粒细胞Fas、Caspase-3蛋白表达量均为染氟组>多维元素干预组>多维元素加蛋白干预组>对照组（P<0.05），随时间延长，染氟组、多维元素干预组、多维元素加蛋白干预组雌鼠Caspase-3蛋白表达量逐渐降低，除多维元素加蛋白干预组120d与180d比较无统计学意义，其余各组各时间点比较均有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：1．过量氟可诱导卵巢颗粒细胞发生凋亡，而氧化应激促进凋亡相关因子 Fas表达和激活 Caspase-3蛋白表达可能是氟诱导卵巢颗粒细胞凋亡的作用机制之一；2．钙、镁、铜、锌、维生素D可通过降低氟负荷、升高卵巢SOD活性、降低MDA含量、增强卵巢抗氧化能力、减轻卵巢颗粒细胞超微结构损伤、下调Fas死亡受体和Caspase-3蛋白表达，拮抗氟的生殖毒性，抑制氟中毒致雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡，联合蛋白质干预效果更佳；3.钙、镁、铜、锌、维生素D与蛋白质对氟中毒致雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡的拮抗作用与时间无明显相关性。

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1 材料与方法

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3 讨 论

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综述：部分金属离子与细胞凋亡研究进展

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