补体成分C3在肾小管上皮细胞表型转化中的作用

摘要

目的：探讨C3在肾小管上皮细胞表型转化中的作用。 方法：(1)体外培养肾小管上皮细胞(HK-2)，将其分成对照组、50ng/ml IFN-γ组和50ng/ml TNF-α组。用RT-PCR法检测HK-2细胞C3 mRNA的表达，Western Blot检测C3蛋白质的表达情况。(2) O.1μM C3a与HK-2细胞共培养24小时，用免疫荧光测定HK-2细胞α-SMA、E-cadherin的表达；(3)将HK-2细胞分成对照组、C3a组、IFN-γ组和TNF-α组，RT-PCR法检测α-SMA、E-cadherin mRNA的表达；Western Blot检测α-SMA、E-cadherin蛋白的表达。 结果：(1)体外培养的肾小管上皮细胞可表达微量C3，分别加入50ng/ml IFN-γ和50ng/ml TNF-α后，肾小管上皮细胞C3 mRNA及蛋白质的表达均明显增加，与对照组比较有显著差异(P<0.01)。(2)免疫荧光检测显示，正常肾小管上皮细胞表达E-cadherin、而无α-SMA表达，经O.1μM C3a刺激24小时，α-SMA表达显著增加，E-cadherin表达明显降低。(3).1μM C3a、50ng/ml IFN-γ和10ng/ml TNF-α与肾小管上皮细胞共培养24小时后，各组α-SMAmRNA表达均明显增强，与对照组比较P<0.01，各组E-cadherinmRNA表达均显著减少，与对照组比较差别有显著意义，P<0.01； 结论：(1)体外培养的肾小管上皮细胞可表达C3，IFN-γ和TNF-α可促进肾小管上皮细胞C3的基因转录及蛋白合成。(2)外源性C3a可在转录和翻译水平上上调α-SMA的表达、抑制E-cadherin的表达，导致肾小管上皮细胞表型的转化，促进小管间充质转分化。(3)细胞因子IFN-γ和TNF-α通过使肾局部C3过度表达而产生的病理损伤作用，可能是其导致肾脏病变的重要途径。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前 言

材料与方法

一、主要试剂与材料

二、主要仪器设备

三、方法

1.人近端肾小管上皮细胞(HK-2)的培养

2.倒置显微镜下观察C3a对HK-2细胞形态的影响

3.免疫荧光检测HK-2细胞α-SMA、E-cadherin的表达。

4.RT-PCR法检测C3、α-SMA、E-cadherin mRNA的表达。

5.Western Blot方法检测HK-2细胞α-SMA、E-cadherin蛋白的表达。

6.统计学处理

结 果

一、HK-2细胞C3 mRNA、蛋白的表达及细胞因子IFN-γ、TNF-α对其表达的影响。

二、显微镜下观察C3a对HK-2细胞形态学影响。

三、免疫荧光显微镜检测HK-2细胞α-SMA、E-cadherin的表达。

四、C3a、TNF-α、IFN-γ对转分化相关基因α-SMA、E-Cadherin mRNA表达的影响。

五、C3a、TNF-α、IFN-γ对HK-2细胞转分化相关蛋白α-SMA、E-Cadherin表达的影响

讨 论

一、肾小管上皮细胞与肾间质纤维化

二、EMT与肾间质纤维化的关系

三、补体与小管间质损伤

结 论

参考文献

致谢

综述 补体在肾小管间质损伤中的作用