妊娠期高血压疾病患者孕中期血清差异蛋白的变化及意义

摘要

目的：
　　 本实验应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（Surface-Enhanced LaserDesorption/IonizationTime of Flight-Mass Spectrometry，SELDI-TOF-MS）技术，探索妊娠期高血压疾病(HDCP)患者孕中期血清差异蛋白表达的变化，寻找能够有助于鉴别妊娠期高血压疾病的早期候选血清蛋白质标志物，为妊娠期高血压疾病提供非侵入性的早期预测性诊断指标，也为研究其发病机制提供实验依据。
　　 方法：
　　 采用前瞻性研究方法，在孕中期（妊娠15～20周）收集孕妇血清并保存至产后12周。将确诊为妊娠期高血压疾病的39例患者（其中妊娠期高血压21例、子痫前期18例）及随机选择的30例正常孕妇的孕中期血清标本，应用美国Ciphergen PBSⅡ表面增强激光解析电离飞行时间质谱（surface-enhanced laser desorption/ionizationtime of flight mass spectrometry, SELDI-TOF-MS）蛋白组学研究技术进行检测，用金属鳌合离子蛋白芯片（imobilized metAlaffinity capture，IMAC3-Gu）获得血清蛋白质表达图谱。采用BMW（Biomarker Wizard）软件分析比较妊娠期高血压疾病患者和正常对照组的血清蛋白质谱差异，随机法选取其中36例，用BPS5.0(Biomarker patterns software)软件筛选出一组差异蛋白峰建立分类决策树模型以鉴别妊娠期高血压疾病患者和健康孕妇，并用另外33例进行盲筛验证。根据差异蛋白的分子量在蛋白质数据库中检索，初步鉴定部分差异蛋白，并用ELISA法对部分差异蛋白表达进行验证，同时探讨其在孕中期孕妇血清中的含量变化对妊娠期高血压疾病的早期预测价值。
　　 结果：
　　 1.妊娠期高血压组与正常对照组血清蛋白谱比较有6个显著差异蛋白(P＜0.01)，其中3个蛋白质在妊娠期高血压患者血清中高表达，质荷比(m/z)分别为8913、11050、11687；另外3个蛋白质在妊娠期高血压患者中低表达，质荷比(m/z)分别为1539、5333、5801。
　　 2.子痫前期组与正常对照组血清蛋白谱比较有8个显著差异蛋白(P＜0.01)，其中2个蛋白质在子痫前期患者血清中高表达，质荷比(m/z)分别为11050、11687；另外6个蛋白质在子痫前期患者中低表达，质荷比(m/z)分别为1539、3684、5333、5900、7748、9262。
　　 3.由BPS软件建立的血清蛋白质谱分类决策树模型，由11050、1539、2795和5063这4个蛋白峰构成，此模型能判别妊娠期高血压组、子痫前期组和正常对照组，敏感性和特异性均为100％，用测试组进行验证后的预测敏感度为75％(12/16)，特异度为94.12％(16/17），准确率为84.85％（28/33）。
　　 4.M/Z为1539、5333、11050、11687的蛋白质为正常对照组与妊娠期高血压组及与子痫前期组共有的差异蛋白，提示它们可能为妊娠期高血压疾病的血清蛋白标志物。经蛋白质数据库中检索，其中3个找到对应的蛋白，其他1个可能为尚未被认识的蛋白：分子量为1539Da的蛋白可能为血纤维蛋白质肽A；分子量为11050Da的蛋白可能为单核细胞趋化因子-1；分子量为11687Da的蛋白质可能为血清淀粉样蛋白A。
　　 5.妊娠期高血压疾病组中分子量为11050Da的蛋白峰表达强度与血清单核细胞趋化因子-1（MCP-1）水平呈正相关（r=0.928，P＜0.01）。
　　 6. ELISA法测定孕中期妊娠期高血压疾病患者血清单核细胞趋化因子-1水平显著高于正常孕妇，通过ROC曲线分析，母体血清MCP-1在妊娠15-20周时预测妊娠期高血压疾病和子痫前期的曲线下面积分别为0.774和0.909，以MCP-1水平≥127.075pg/ml为界限值，预测妊娠期高血压疾病的敏感度为64.10％、特异度为80.00％、阳性预测值为51.02％、阴性预测值为87.27％、阳性拟然比为3.21；预测子痫前期的敏感度为94.40％、特异度为80.00％、阳性预测值为41.46％、阴性预测值为98.97％、阳性拟然比为4.72。
　　 结论：
　　 1.SELDI-TOF-MS技术筛选出的血清差异蛋白有可能作为妊娠期高血压疾病发生发展的特异指标，也为在蛋白质组学方面研究妊娠期高血压疾病的发病机理奠定一定的基础。
　　 2.妊娠期高血压组、子痫前期组分别与正常对照组的血清蛋白质谱存在不同的差异，表明妊娠期高血压与子痫前期可能有着不同的病理生理改变
　　 3、采用搜库法初步鉴定出3种差异蛋白，初步鉴定结果提示妊娠期高血压疾病与凝血功能、免疫炎症反应及氧化应激等有关。
　　 4、本研究建立的分类决策树模型对妊娠期高血压疾病的早期预测与诊断有一定意义。
　　 5、MCP-1在妊娠期高血压疾病患者血清中明显升高，提示其可能在妊娠期高血压疾病的发生发展中起重要作用，其水平的变化可作为该病早期预测的生物学指标。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英 文 缩 写 词 表

前 言

第一部分 SELDI－TOF-MS筛选妊娠期高血压疾病孕中期血清特异性标志物

第二部分 MCP-1在孕中期妊娠期高血压疾病患者血清中的变化及意义

全文小结

参 考 文 献

致 谢

子痫前期预测的现状与展望(综述)

附 录