阿托伐他汀调节PI3K/Akt/eNOS途径对UUO小鼠管周微血管密度的影响及机制

摘要

目的：探讨阿托伐他汀(atrovastatin, ATO)调节磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶-B/内皮型一氧化氮合酶(phosphatidylinositol-3 kinase/protein kinase-B/endotheliAlnitricoxide synthase, PI3K/Akt/eNOS) 途径对单侧输尿管梗阻(unilaterAlureterAlobstruction, UUO)肾间质纤维化(renAlinterstitium fibrosis, RIF)小鼠管周微血管(peritubular capillary, PTC)密度的影响及机制。
　　 方法：96只SPF级雌性昆明小白鼠随机分为3组，每组32只：①单侧输尿管结扎组(UUO组)：行右侧输尿管结扎术；②假手术组(Sham组)：进入腹腔后游离右侧输尿管但不结扎；③单侧输尿管结扎+阿托伐他汀干预组(ATO组)：结扎右侧输尿管后，予阿托伐他汀5mg.kg-1.d-1灌胃直至处死。分别于实验第7、14、21、28天每组随机抽取8只小鼠，颈椎脱臼处死，留取血液和肾脏标本：①检测血尿素氮、肌酐水平。②流式细胞检测外周血单个核细胞中CD133+/VEGFR2+双阳性细胞比例。③Masson染色后光镜下观察肾组织形态改变，并进行肾间质纤维化评分。④免疫组化检测肾间质Akt、p-Akt和eNO的表达。⑤免疫组化检测肾间质CD34+细胞数目以评估PTC 密度。
　　 结果：①血尿素氮、肌酐水平：整个实验过程中三组小鼠血尿素氮、肌酐未见明显变化，各组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。②外周血单个核细胞中CD133+/VEGFR2+双阳性细胞比例：造模前随机抽取8只小鼠检测外周血CD133+/VEGFR2+双阳性细胞比例作为正常对照组。实验后三组小鼠外周血单个核细胞中CD133+/VEGFR2+双阳性细胞比例均于第1周末升高达峰值，较正常对照组明显升高(P<0.05)，第2周后下降；Sham组第2、3、4周较正常对照组无明显变化(P>0.05)，UUO组第2周末将至正常水平以下，第3、4周较正常对照组明显降低(P<0.05)，ATO组第2、3、4周较正常对照组明显升高(P<0.05)。③肾间质纤维化评分：Sham组肾间质纤维化评分在各时间点无明显变化，UUO组和ATO组肾间质纤维化评分均随着造模时间延长逐渐加剧，整个实验过程中ATO组较同期UUO组明显降低，但仍较同期Sham组升高，差异有统计学意义(P<0.05)。④Akt和p-Akt的表达：Sham组肾间质Akt、p-Akt的表达未见明显变化，UUO组第1周肾间质Akt、p-Akt 较Sham 明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，第2、3、4周表达逐渐下降，第3、4周较Sham组显著降低(P<0.05)；ATO组肾间质Akt、p-Akt的表达在第1周末达高峰，以后随造模时间延长逐渐降低，各时间点均高于同期Sham组和UUO组(P<0.05)。eNOS ⑤的表达：Sham组肾间质eNOS的表达未见明显变化，UUO组和ATO组肾间质eNOS的表达均随着造模时间延长逐渐降低，第2、3、4周均明显低于Sham组(P<0.05)，第2、3、4周各时间点ATO组较UUO组明显升高(P<0.05)。⑥PTC密度计数：Sham组肾间质PTC 密度未见明显变化，UUO组和ATO组肾间质PTC 密度均随着造模时间延长逐渐降低，第2、3、4周均明显低于Sham组(P<0.05)，第2、3、4周各时间点ATO组较UUO组明显升高(P<0.05)。相关分析显示UUO组和ATO组以下指标之间存在直线相关关系：p-Akt与EPCs之间呈直线正相关(r=0.902, P<0.01)；EPCs与PTC密度之间呈直线正相关(r=0.720, P<0.01)；p-Akt与eNOS之间呈直线正相关(r=0.569, P<0.01)；eNOS与PTC密度之间呈直线正相关(r=0.762, P<0.01)。
　　 结论：①阿托伐他汀可以增加UUO小鼠肾间质PTC密度，从而延缓RIF。②阿托伐他汀增加UUO小鼠肾间质PTC密度可能是通过激活PI3K/Akt/eNOS信号转导途径实现的。③阿托伐他汀调节PI3K/Akt/eNOS通路动员EPCs、促进微血管再生和改善内皮功能促进内皮修复是它增加PTC密度从而延缓RIF的可能机制。

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综述他汀类药物非降脂作用与肾脏保护关系的研究进展

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