共培养法诱导骨髓间充质干细胞向毛细胞样细胞分化的实验研究

摘要

目的:建立体外共培养法定向诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）向毛细胞样细胞分化的方法。
　　 方法：采用全骨髓贴壁法分离培养小鼠骨髓中的间充质干细胞。并传代和纯化。第三代用荧光免疫组化法检测细胞表面标志蛋白CD44、CD34、CD106、Vimentin的表达。采新生小鼠脑胶质细胞 (ASTs) 体外培育到第三代，用荧光免疫组化法检测胶质细胞表达标志蛋白GFAP的表达。采新生小鼠耳基底膜细胞（BAMCs）体外扩增培育至第三代备用。取第三代的BMSCs与ASTs共培养，并联合RA （DMEM/F12/RA+10％FBS）诱导培养7天,使BMSCs向神经前体细胞分化。诱导后的细胞用荧光免疫组化法检测神经前体标志蛋白(Nestin)的表达情况。诱导后所得的细胞再与BAMCs共培养于DMEM/F12+10％FBS中14天,诱导其向毛细胞样细胞分化。并用荧光免疫组化法检测听毛细胞标记物（Math1和MyosinVIIa）蛋白的表达。采用RT-PCR法检测Math1和MyosinVIIa mRNA的表达。
　　 结果:经ASTs共培养并联合RA诱导后的BMSCs表达神经前体细胞特异性蛋白Nestin。此种神经前体细胞与BAMCs共培养后，部份细胞表达毛细胞特异性标志蛋白Math1、MyosinVIIa mRNA和蛋白。
　　 结论：BMSCs经与ASTs共培养并联合RA诱导后，所得细胞再与BAMCs共培养，能诱导分化出部份表达Math1和MyosinVIIa mRNA和蛋白的毛细胞样细胞。共培养法能诱导BMSCs向毛细胞样细胞分化。

目录

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材料与方法

方法

结果

讨论

参考文献

综述 干细胞诱导分化成毛细胞的研究进展

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