阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物诱导人内皮细胞表达MCP-1mRNA的影响及其机制研究

摘要

目的：观察阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导的体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA的影响，并探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）和核因子-κB（NF-κB）在阿托伐他汀抗炎效应中的作用。
　　 方法:
　　 1胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞，取第3至5代细胞用于实验。
　　 2 倒置相差显微镜形态观察法及免疫细胞化学染色法鉴定人脐静脉内皮细胞。
　　 3 实验分组：①空白对照组；②牛血清白蛋白（BSA）组：用于与AGEs（AGE-BSA）组对照；③AGEs组：不同作用浓度的AGEs（10-4-10-1mg/ml）与细胞共同孵育24小时；④阿托伐他汀组：不同作用浓度的阿托伐他汀（0.1、1、10μmol/L）分别与细胞孵育1小时后，加入AGEs（10-1mg/ml(根据③实验结果选取最佳浓度)与细胞共孵育24小时；⑤15d-PGJ2（PPAR-γ激动剂）组：15d-PGJ2（10μmol/L）与细胞孵育1小时后，加入AGEs（10-1mg/ml）与细胞共孵育24小时；⑥GW9662（PPAR-γ 抑制剂）组：GW9662（5000nmol/L）与细胞孵育1小时后，加入AGEs（10-1mg/ml）和阿托伐他汀（1μmol/L）（根据④实验结果选取最佳浓度）与细胞共孵育24小时。
　　 4 逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测细胞MCP-1和PPAR-γ mRNA表达水平。
　　 5蛋白免疫印记法（Western-blot）测细胞核内NF-κB p65水平。
　　 结果:
　　 1倒置相差显微镜下可见培养的细胞呈卵圆形或多角形，典型的铺路石样排列。经CD31、CD34 染色，细胞胞浆内有棕黄色颗粒沉着（CD31、CD34阳性）。
　　 2 AGEs（10-4-10-1mg/ml）呈浓度依赖性促进人内皮细胞MCP-1mRNA表达，分别是空白对照组的1.53倍、2.12倍、2.56倍、4.71倍；AGEs浓度为10-4mg/ml时，细胞MCP-1mRNA表达水平即明显增高（0.26±0.02vs0.17±0.04，P＜0.01）。
　　 3与AGEs组比较，阿托伐他汀（0.1、1、10μmol/L）呈浓度依赖性抑制细胞MCP-1mRNA表达；阿托伐他汀浓度为1μmol/L时，细胞MCP-1mRNA表达水平显著降低（0.63±0.11vs1.03±0.07，P＜0.01）。
　　 4与空白对照组相比，AGEs组人内皮细胞PPAR-γ mRNA表达水平明显降低（0.22±0.08vs0.69±0.09，P＜0.01），细胞核内NF-κB p65水平显著升高（0.78±0.06vs0.31±0.01，P＜0.01）；与AGEs组比，阿托伐他汀（1μmol/L）组细胞PPAR-γ mRNA表达水平明显升高（0.59±0.02vs0.22±0.08，P＜0.01），细胞核内NF-κB p65水平显著降低（0.40±0.03vs0.78±0.06，P＜0.01）。
　　 5与AGEs组相比，15d-PGJ2组细胞核内NF-κB p65水平显著降低(0.21±0.01vs0.78±0.06，P＜0.01）、MCP-1mRNA表达水平明显降低（0.17±0.02vs0.93±0.12，P＜0.01）；与阿托伐他汀组比，GW9662组细胞核内NF-κB p65水平明显升高（0.53±0.02vs0.40±0.03，P＜0.01）、MCP-1mRNA表达水平显著升高（0.62±0.05vs0.30±0.07，P＜0.01）。
　　 结论:
　　 1胶原酶消化法可获得高纯度的人脐静脉内皮细胞，为体外研究血管内皮细胞的病理生理学特性提供了理想实验模型；
　　 2 AGEs可下调人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA表达水平，增强细胞NF-κB活化，促进细胞MCP-1mRNA表达；
　　 3 阿托伐他汀可减弱AGEs对人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA表达的下调作用，抑制细胞NF-κB 活化，降低细胞MCP-1mRNA表达水平；
　　 4 PPAR-γ的激活可抑制细胞NF-κB 活化，减少细胞MCP-1mRNA表达；
　　 5 阿托伐他汀可能是通过激活细胞PPAR-γ 抑制NF-κB的活化在动脉粥样硬化防治中发挥抗炎作用的。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词表

声明

前言

第一部分人脐静脉内皮细胞的体外培养与鉴定

第二部分阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物诱导人内皮细胞表达MCP-1 mRNA的影响及其机制

参考文献

综述过氧化物酶增殖物激活受体γ 的抗动脉粥样硬化作用研究现状

附录

致谢