尿激酶型纤溶酶原激活物在肾小管上皮细胞转分化中的表达及其意义

摘要

目的：建立单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型，探索UUO不同时间点尿激酶型纤溶酶原激活物（u-PA）表达与肾小管上皮细胞转分化（EMT）的关系，分析u-PA对EMT的影响。
　　方法：普通级SD雄性大鼠64只，3-4周龄，体重100-120g。随机分为假手术组（Sham）和UUO组，每组各32只。各组大鼠在左侧输尿管结扎术后3d,7d,14d,28d各处死8只实验大鼠，取梗阻一侧肾脏组织进行病理学分析，观察各组大鼠在UUO后不同时间点肾小管间质损伤、肾间质纤维化程度及肾小管基底膜（TBM）破坏程度，并采用免疫组织化学染色方法观察u-PA在各组的表达及钙粘蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连结蛋白（FN）的动态变化。分别对Sham组和UUO组各时间点相关观察指标进行组间、组内比较，并对UUO组u-PA与E-cadherin阳性评分、TBM断裂的肾小管百分比进行相关性分析。数据运用SPSS16.0统计软件进行分析。
　　结果：与Sham组相比，UUO组肾小管间质损伤程度、肾间质纤维化程度及TBM破坏程度均明显加重（P﹤0.05）。随着梗阻时间的延长，肾小管间质中α-SMA、FN表达逐渐增加，E-cadherin表达逐渐减少，UUO组术后3d可见u-PA蛋白在肾间质表达呈阳性，术后7d达峰值，14d至28d则呈下降趋势。UUO早期（梗阻7d前）u-PA阳性染色评分与 E-cadherin阳性染色评分呈负相关（r=-0.993，P﹤0.05）；UUO中晚期（梗阻7d之后）u-PA阳性染色评分与E-cadherin阳性染色评分呈正相关（r=0.955，P﹤0.05）。UUO组u-PA表达与TBM断裂的肾小管百分比的相关性分析发现，两者呈正相关关系（r=0.556,P﹤0.001），这反过来提示我们，UUO组u-PA表达与TBM完整性呈负相关关系。
　　结论：①UUO大鼠模型是研究EMT的较理想动物模型。②肾间质u-PA蛋白表达的动态变化影响TBM的完整性和肾脏ECM的堆积，参与EMT，影响肾脏纤维化的进展。③UUO初期肾组织中u-PA可通过自身保护代偿性分泌，其在一定程度上延缓EMT的进程；随着肾脏纤维化的进一步加重,肾小管上皮细胞变性坏死，肾组织失去代偿能力，后期肾组织中u-PA的分泌逐渐减少，EMT及肾脏纤维化向不可逆方向发展。

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引言

材料与方法

1.1 实验试剂

1.2 实验仪器

1.3 实验动物模型

1.4 组织标本相关操作

1.5 观察指标

1.6、统计学方法

结果

2.1 肾组织大体形态学观察

2.2 肾脏常规病理学观察

讨论

3.1 UUO大鼠模型与RIF

3 . 2 肾脏纤维化与EMT

3.3 u-PA与纤溶系统

3.4 u-PA 与 EMT

3.5 本实验研究存在的问题和展望

结论

参考文献

附图

致谢

综述

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