姜黄素衍生物FM0807下调Raf-1/MEK/ERK信号转导抑制鼻咽癌增殖作用的研究

摘要

鼻咽癌（NPC）是我国南方常见的头颈部恶性肿瘤。早期首选放射治疗，化疗与手术常作为晚期患者的辅助治疗措施。但是放疗也有一定的局限性，放疗在杀伤癌细胞的同时还损伤了周围正常组织，留下许多后遗症如放射性中耳炎、放射性骨坏死、味觉丧失等，并且许多患者在就诊时已为中晚期，单靠放疗不能取得良好的效果。而常用的化疗药物顺铂、5－FU等毒副作用大，如肾毒性、耳毒性、神经毒性、心脏毒性等等。因此寻找毒副作用小、疗效好的辅助性治疗方法是目前研究抗鼻咽癌的热点。
　　姜黄素（Curc umin,Cur）是一种来源于植物的多酚类物质，常作为食品添加剂和染料。同时，姜黄素还有广泛的药理作用，如抗炎、抗氧化、抗HIV病毒、抗感染及抗肿瘤等，是一种较有潜力的抗癌新药。但是姜黄素水溶性差、生物利用度低的缺点限制了它的使用，福建医科大学药学院对姜黄素进行结构改造，合成了姜黄素衍生物FM0807。目前姜黄素应用于鼻咽癌的相关报道较少，本研究观察姜黄素衍生物FM0807的体内外抗鼻咽癌作用并探讨其机制，为临床应用提供理论依据。
　　目的:本课题旨在研究姜黄素衍生物 FM0807体内外抗鼻咽癌的效应并探讨其作用机制，探索分子靶向治疗鼻咽癌的新方法。
　　方法:（1）运用MTT法、台盼蓝排染计数法及集落形成试验观察Cur及FM0807对NPC细胞增殖能力的影响.（2）运用集落形成试验和Western blot观察FM0807对正常表皮细胞Rhek增殖能力及P-ERK1/2蛋白表达的影响.（3）运用Hoechest33342/PI双染、免疫印迹等技术观察FM0807对NPC细胞周期及凋亡的影响.（4）运用RT-PCR与Western blot技术分析FM0807对CNE2细胞EGFR与ERK1/2的mRNA和蛋白水平的影响，并用Western blot观察FM0807能否抑制EGF调节的ERK/MAPK存活信号.（5）运用免疫共沉淀技术分析对Hsp90的分子伴侣功能的影响.（6）运用Western blot分析FM0807对NPC细胞Raf-1/MEK/ERK通路的影响.（7）建立CNE2细胞裸鼠移植瘤模型，观察FM0807体内抗癌活性，检测肿瘤生长曲线及瘤重的变化。运用Western blot检测FM0807对瘤块Raf-1/MEK/ERK通路的影响。
　　结果:（1）Cur与FM0807均能抑制NPC细胞增殖，呈剂量依赖性，集落形成试验还表明FM0807的抗癌作用优于其母体化合物Cur.（2）FM0807对Rhek细胞克隆形成能力的影响较小，且不改变其细胞内P-ERK1/2蛋白的表达.（3）FM0807引起NPC细胞周期停滞及细胞凋亡.（4）FM0807在mRNA及蛋白水平均不影响CNE2细胞EGFR与ERK1/2的表达，但能抵抗EGF对P-ERK1/2的促进作用.（5）FM0807能够抑制Hsp90功能，使其客户蛋白Raf-1与MEK1/2降解.（6）FM0807于体外下调Ra f-1/MEK/ERK通路.（7）FM0807在裸鼠体内具有一定的抗癌作用，其瘤块生长减慢，瘤重减轻，并且在体内也能下调肿瘤组织Raf-1/MEK/ERK通路。
　　结论:（1）FM0807在体外对正常细胞影响较小，但能够抑制NPC细胞增殖，促进其凋亡并诱导细胞周期停滞.（2）FM0807在体内也具有一定的抗鼻咽癌活性.（3）FM0807抗鼻咽癌的机制可能与其抑制Hsp90的分子伴侣功能有关，通过使Raf-1与MEK1/2等客户蛋白失去Hsp90的保护而被降解，进而下调Raf-1/MEK/ERK通路的信号转导。

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前言

第一部分 姜黄素衍生物FM0807体外抗鼻咽癌作用

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 Cur及FM0807抑制NPC细胞增殖

2.2 FM0807对正常细胞的影响较小

2.3 FM 0807诱导细胞凋亡

2.4 FM0807抑制EGF激活的ERK/MAPK信号路径

2.5 FM0807通过下调Hsp90客户蛋白而抑制Raf-1/MEK/ERK信号转导途径

3 讨论

第二部分 姜黄素衍生物FM0807体内抗鼻咽癌作用

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 FM 0807体内抑制鼻咽癌生长

2.2 FM0807对人鼻咽癌CNE2裸鼠移植瘤Raf-1/MEK/ERK信号通路的影响

3 讨论

参考文献

致谢

综述

参考文献