人外周血耐受性树突状细胞的诱导培养及其DC-STAMP的表达研究

摘要

目的:诱导培养人外周血耐受性树突状细胞（TolDCs）并动态观察TolDCs诱导过程树突状细胞-特异性跨膜蛋白(dendritic cells-specific transmembrane protein,DC-STAMP)mRNA的表达水平。
　　方法:（1）免疫磁珠分选法获得人外周血CD14+单核细胞，采用细胞因子GM-CSF、IL-4、地塞米松和LPS联合培养诱导TolDCs;（2）观察培养细胞的形态变化，流式细胞技术检测CD83、CD86和CD14的表达，并将培养的细胞与T淋巴细胞共培养观察T淋巴细胞增殖反应;（3）采用实时定量PCR对TolDCs诱导培养过程中DC-STAMP mRNA表达水平进行动态观察。
　　结果:（1）CD14+单核细胞经粒细胞巨噬细胞刺激因子（Granulocyte-mac rop ha ge colony-stimulating factor，GM-CSF）、白介素-4（Interleukin-4，IL-4）、脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导培养后胞体变大，出现树枝状突起，为典型的成熟DCs形态，加地塞米松磷酸钠（Dexamethasone sodium phosphate，Dex）诱导培养后胞体亦变大，但未见明显树枝状突起，缺乏典型的成熟DCs形态;（2）CD14+单核细胞经GM-CSF、IL-4培养后使CD83和CD86表达上调，CD14表达下调，加Dex联合诱导培养后DCs表面CD83、CD86表达下调、CD14表达上调，与T淋巴细胞共培养后增殖反应明显减弱，显示TolDCs的免疫表型和功能特性;（3）CD14+单核细胞经GM-CSF、IL-4培养后DC-STAMP mRNA的表达水平随培养时间延长降低，加入Dex联合诱导后表达水平明显增加。
　　结论:人外周血CD14+单核细胞采用GM-CSF、IL-4和Dex联合培养可诱导TolDCs生成,DC-STAMP可能与DCs的致耐受功能有关。

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引言

材料与方法

1 材料

1.1 主要试剂

1.2 主要仪器

2 方法

2.1 树突状细胞的体外诱导培养

2.2树突状细胞的鉴定及功能测定

2.3 实时定量RT-PCR测定DC中DC-STAMP的表达

2.4 统计学分析

结果

1 PBMNC免疫磁珠分选前后细胞活力及免疫表型的测定

1.1 细胞存活率测定

1.2 倒置相差显微镜和扫描电镜观察DCs培养过程中的形态变化

1 . 3 流式细胞仪检测培养细胞的CD 14、CD 83、C D86的表达情况

1 . 4混合淋巴细胞反应检测DC刺激T淋巴细胞增殖的能力

1.5实时定量PCR对体外培养细胞的DC-STAMP mRNA表达水平进行动态观察

讨论

全文总结

参考文献

致谢

附录

综述

参考文献