虾青素通过HO-1/NOX2途径抑制MPP+诱导PC12细胞氧化损伤

摘要

背景：
　　帕金森病是一种中老年人常见的神经退行性疾病，而氧化应激在PD发病过程中发挥着至关重要作用。近年来发现虾青素是一种类胡萝卜素，可通过血脑屏障，具有很强的清除自由基、抗氧化损伤、抗凋亡等生物学作用。HO-1/NOX2细胞信号途径在MPP+诱导的PC12细胞氧化应激损伤中作用机制未见报道，虾青素是否通过HO-1/NOX2途径拮抗MPP+诱导的PC12细胞氧化应激损伤也未见报道。
　　目的：
　　1、探讨氯化血红素对MPP+诱导的PC12细胞模型的保护机制及其与HO-1/NOX2途径之间的关系。
　　2、探讨虾青素对MPP+诱导的PC12细胞模型的保护作用及其分子机制。
　　方法：
　　1、MTT法检测细胞活力，观察不同浓度MPP+、ATX、He min、SnPP IX、DPI培养PC12细胞24h后的细胞活力变化。
　　2、流式细胞仪分析技术检测PC12细胞胞内ROS水平。
　　3、免疫印迹法和Real-time RCR分别半定量PC12细胞内NOX2、Nrf2、HO-1蛋白以及NOX2、HO-1mRNA的表达。
　　4、细胞免疫荧光技术检测NOX2、HO-1蛋白在PC12细胞内的亚细胞定位和表达情况。
　　结果：
　　1、MTT法测定发现MPP+处理细胞存活率明显下降，ATX、SnPPIX、He min处理后细胞存活率与空白对照组比较无明显变化。
　　2、ROS检测显示虾青素能抑制MPP+诱导PC12细胞ROS的产生，且呈浓度依赖性。
　　3、免疫印迹法结果显示，MPP+处理细胞后NOX2、HO-1、Nrf2升高(P＜0.05)；经氯化血红素和虾青素预处理后，细胞内NOX2蛋白表达水平下降，而Nrf2和HO-1蛋白水平升高。
　　4、Real-time RCR结果显示，MPP+处理细胞后NOX2、HO-1mRNA升高(P＜0.05)；经氯化血红素和虾青素预处理后，细胞内NOX2 mRNA表达水平下降，而HO-1mRNA水平升高。
　　5、共聚焦显微镜观察结果显示，MPP+明显增加NOX2和HO-1表达，其荧光范围伸长扩大，而该结果被DPI抑制。经氯化血红素和虾青素预处理后，细胞内NOX2蛋白荧光强度减弱，而HO-1蛋白荧光强度增强。
　　结论：
　　1、氯化血红素诱导HO-1表达水平上调和抑制NOX2表达，即HO-1过表达可抑制NOX2依赖的ROS产生，以减少MPP+诱导的氧化应激损伤。
　　2、虾青素可通过活化HO-1/NOX2途径，抑制ROS产生，而使PC12细胞免受MPP+介导的氧化损伤。

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引言

材料和方法

1 实验主要仪器和试剂

1.1 细胞株

1.2主要仪器

1.3 主要试剂

2. 方法

2.1 PC12细胞培养

2.2 M TT 法检测细胞存活率

2.3流式细胞仪检测PC12细胞内ROS产生水平

2.4 细胞分组

3．实验方法

3.1 免疫印迹

3.2 Real-time PCR

3.3 荧光共聚焦显微镜观察免疫细胞荧光

3.4统计学处理

结果

1 . M TT法测定不同药物干预对PC12细胞存活率的影响

2. 虾青素减弱MPP+诱导PC12细胞氧化应激产生ROS

3. Hemin,SnPPIX和DPI对MPP+诱导PC12细胞表达NOX2、Nrf2和HO-1水平的影响

4 虾青素对MPP+诱导PC12细胞表达NOX2、Nrf2和HO-1水平的影响

讨论

结论

参 考 文 献

致谢

综述

参考文献：