慢性乙型肝炎患者外周血Treg/Th17细胞及相关细胞因子的检测及其意义

摘要

目的：检测慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血Treg、Th17细胞频数及其相关细胞因子的水平，探讨其在CHB发生发展及疾病转归中的作用。
　　方法：1．外周血Treg细胞和Th17细胞与临床指标的相关性研究：选取HC20例，轻中度慢性乙型肝炎患者（CHB-LM）46例，重度慢性乙型肝炎患者（CHB-S）24例作为研究对象，采用流式细胞仪检测外周血 Treg细胞和 Th17细胞频率，并计算Treg/Th17比值。比较三组之间上述指标的差异，并分析CHB患者上述指标与性别、年龄、HBeAg状态、生化指标（ALT、AST、TBil、DBil）及病情严重程度的相关性。
　　2．外周血血清中相关细胞因子与生化指标的相关性研究：采用ELISA方法检测血清TGF-β1、IL-10、IL-17及IL-23水平。分析HC组、CHB-LM组和CHB-S组之间各细胞因子水平的差异及其与ALT、AST、TBil、DBil的相关性。
　　3．治疗前后Treg、Th17细胞及其相关细胞因子的变化及与生化指标的相关性研究：分析CHB患者核苷（酸）类似物（NA）抗病毒治疗前后，Treg、Th17频率、Treg/Th17比值和相关细胞因子的变化差异，及其与ALT、AST、TBil、DBil的相关性。
　　结果：1．HC组与CHB患者比较：CHB组Treg和Th17频率均明显高于HC组（P=0.025、0.005），Treg/Th17比率低于HC组（P=0.047）。Treg频率与TBil、DBil、AST呈正相关（P<0.05）。HBeAg阳性CHB患者Treg/Th17比率与TBil、DBil、ALT呈正相关（P<0.05），HBeAg阴性患者Treg/Th17比率与ALT呈负相关（P<0.05）。
　　Treg频率在HC组、CHB-LM组和CHB-S组外周中依次升高（χ2＝7.914，P＝0.019），三组间差异均有统计意义（P<0.05）。CHB-LM组和CHB-S组Th17频率均明显高于HC组（均P<0.01），CHB-LM组和CHB-S组相比无显著差异（P>0.05）。CHB-LM组Treg/Th17比率明显低于CHB-S组（P<0.05）。Treg、Th17频率和Treg/Th17比率与患者性别、年龄、HBeAg状态均无关（P>0.05）。
　　2．IL-10和IL-23水平CHB-LM组和CHB-S组明显高于HC组（P<0.05），CHB-LM组和CHB-S组间无统计学差异。TGF-β1水平明显高于CHB-LM组和HC组（P<0.05），CHB-LM组和HC组间无统计学差异。IL-17水平在三组中呈增高趋势（χ2＝0.85，P=0.645）。IL-10与IL-23呈正相关（P<0.01），TGF-β1与TBil、DBil呈正相关（P<0.05）。
　　3．NA抗病毒12周后，CHB患者Treg细胞及细胞因子IL-10、TGF-β1和IL-23较治疗前均明显下降（P<0.05），Th17细胞及IL-17略上升，Tre g/Th17比率下降（P>0.05）。Treg细胞与Treg/Th17比率、TBil、DBil、AST均呈正相关（P<0.05）；IL-10与IL-23呈正相关（P<0.01）；IL-17与ALT、AST呈正相关（P<0.05）。HBeAg阳性CHB患者Treg/Th17比率与TBil呈正相关（P<0.05）。
　　结论：CHB患者Treg/Th17比率下降；随着肝损伤程度加重，Treg/Th17比率上升；治疗有效后Treg/Th17比率继续下降，表明Treg/Th17失衡在CHB发生发展及转归中具有重要作用。Th17细胞和IL-17参与CHB致病的过程，但与肝损伤程度无关，而Treg细胞和Treg/Th17比率与肝损伤程度相关，TGF-β1在可能其中发挥重要作用。对于HBeAg阳性CHB患者，Treg/Th17比率可能是一个有效的评估其治疗疗效的免疫指标。

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前言

1. 材料

1.1 血液标本来源及分组

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2. 方法

2.1 标本采集及细胞分离

2.2 检测CD4+CD25+CD127lowTreg细胞、CD3+CD8-IL-17+Th17细胞的比例

2.3 外周血血清中相关细胞因子的检测

2.4 其他指标检测

2.5 统计学分析

3. 结果

3.1 各组患者的临床和生化指标的比较

3.2 外周血Tre g、Th17细胞及Tre g/Th17比率的检测

3.3 外周血血清中Tre g和Th17细胞相关细胞因子的检测

3.4 综合治疗后Tre g细胞、Th17细胞及其相关细胞因子的检测

4. 讨论

4.1 Th17细胞与CHB

4.2 Tre g细胞与CHB

4.3 Tre g/Th17平衡与CHB的发生发展

4.4 Treg/Th17平衡与CHB的转归

4.5 Treg、Th17细胞及相关细胞因子之间的相关性

全文总结

参考文献

致谢

文献综述

参考文献：

附录：试剂配方

攻读学位期间已发表的文章

攻读学位期间参与科研项目