PI3K/AKt/eNOS/HSP70介导阿托伐他汀后处理减轻2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤

摘要

目的：研究显示，药物后处理可通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤。然而，药物后处理对糖尿病心肌缺血再灌注损伤是否有保护作用，国内外报道仍有很大争议。本实验通过在体2型糖尿病大鼠（GK大鼠）心肌缺血再灌注损伤模型，探讨不同剂量阿托伐他汀后处理对2型糖尿病GK大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制。
　　方法：将GK大鼠70只，体重280-350g随机分为7组（n=10只），分别为：（1）假手术组（Sham组）：只穿线不结扎左前降支；剩余6组均予心肌缺血40min，再灌注180min处理：（2）缺血再灌注对照组（I/R组）：不予其他处理；（3-6）不同剂量（0.1,0.5,1或2mg/kg）阿托伐他汀后处理组（AP0.1,0.5,1或2mg/kg组）：再灌注前3min颈外静脉缓慢推注不同剂量阿托伐他汀(用10％DMSO溶解)；（7）理想剂量阿托伐他汀后处理+LY294002组（AP+LY组），再灌注前15min经颈外静脉缓慢推注磷酸肌醇3激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002（0.3mg/kg），再灌注前3min颈外静脉缓慢推注阿托伐他汀。ELISA试剂盒测定血清钙蛋白(cTnT)水平；氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测定心肌梗死面积；电镜观察心肌细胞超微结构变化及Western blot测定心肌组织磷酸化蛋白激酶B（AKt）蛋白（p-Akt）、总Akt(t-Akt)、磷酸化eNOS蛋白（p-eNOS）及总eNOS(t-eNOS)蛋白、HSP-70的表达。
　　结果：1、与I/R组相比，不同剂量（0.1,0.5,1或2mg/kg）阿托伐他汀后处理组血清cTnT，心肌梗死面积减小，心肌细胞超微结构损伤程度减轻，Flameng评分改善（P<0.05）。2、相对于阿托伐他汀后处理0.1mg/kg组、0.5mg/kg组以及1mg/kg组，阿托伐他汀后处理2mg/kg组，能进一步减小心肌梗死面积，减小血清cTnT值，减轻心肌细胞超微结构损伤程度（P<0.05）。3、与I/R组相比，不同剂量（0.1,0.5,1或2mg/kg）阿托伐他汀后处理组Akt和eNOS的磷酸化水平增加，HSP70的表达水平增加（P<0.05）。4、相对于阿托伐他汀后处理0.1mg/kg组、0.5mg/kg组以及1mg/kg组，阿托伐他汀后处理2mg/kg组，能明显使 Akt和eNOS的磷酸化水平增加，HSP70的表达水平增加。5、与I/R组相比，阻滞剂组心肌梗死面积、血清cTnT值、细胞超微结构损伤程度、AKt和eNOS的磷酸化水平、HSP70的表达水平均无统计学差异（P>0.05）。
　　结论：1、阿托伐他汀后处理能减轻2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤；2、阿托伐他汀后处理减轻2型糖尿病心肌缺血再灌注损伤程度和阿托伐他汀的剂量相关。3、阿托伐他汀后处理通过激活PI3K/AKt/eNOS信号通路而诱导了抗心肌缺血再灌注损伤的作用；4、HSP70参与了阿托伐他汀后处理对2型糖尿病缺血再灌注损伤心肌的保护作用，它可能是PI3K/Akt/eNOS信号通路的一个下游靶点。

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前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1 心肌缺血及梗死面积比较（表1、图1）

2 心肌细胞超微观察结果（表2、图3）

GK大鼠血清肌钙蛋白T（cTnT）的测定结果（表3）

4Western blot检测结果

讨论

阿托伐他汀与M IRI

糖尿病与MIRI

PI3K/AKt/eNOS和MIRI

HSP70与PI3K/AKt/eNOS和MIRI的关系

结论

参考文献

综述

参考文献

致谢