温敏性氯化壳聚糖水凝胶增强脂肪间充质干细胞治疗急性肾损伤的疗效

摘要

目的：间充质干细胞（MSCs）已经被认为是一种非常有潜力的干细胞移植治疗急性肾损伤（AKI）。然而这种治疗的疗效受限于移植的MSCs在靶向区域的低滞留率和低存活率。温敏性氯化壳聚糖（CSCI）水凝胶作为一种可注射性支架材料，具有良好的生物相容性和可降解性，已经被广泛的用于各种组织工程中。在本项研究中，CSCI水凝胶作为可注射性支架传递脂肪间充质干细胞（ADMSCs）移植治疗缺血再灌注（I/R）引起的急性肾损伤（AKI）。
　　材料和方法体外：分离和培养大鼠ADMSCs并鉴定其表型，携带有荧光素酶-红色荧光蛋白（fluc-mrfp）报告基因的慢病毒转染ADMSCs,并鉴定fluc-mrfp两种报告基因的表达以及转染后ADMSCs的成脂、成骨分化能力；制备温敏性CSCI水凝胶，Live/Dead染色检测CSCI水凝胶与ADMSCs的细胞相容性。体内：构建成年SD大鼠（150-200g）的缺血再灌注损伤的AKI模型，温敏性CSCI水凝胶携带或不携带ADMSCs注射到大鼠AKI模型中。DHE染色用来检测体内活性氧（ROS）的水平。为了示踪移植体内的ADMSCs,使用活体生物发光成像仪（BLI）检测（fluc-mrfp）标记的ADMSCs在大鼠肾脏内的滞留和存活情况。HE染色及血清肌酐（CRE）和尿素氮（BUN）水平用来检测肾脏的损伤和肾功能恢复情况。免疫荧光染色用来研究ADMSCs在体内的分化情况。宿主肾脏细胞的增殖和凋亡使用PCNA染色和TUNEL染色法。
　　结果：体外：ADMSCs呈长梭形，流式细胞仪示：CD29,CD90表达阳性，CD34，CD45,CD31表达阴性。慢病毒转染后的ADMSCs表达fluc-mrfp报告基因，并且仍具有成脂、成骨分化的能力。Live/Dead染色证实CSCI水凝胶和ADMSCs复合后具有良好的细胞相容性。体内：CSCI水凝胶可以明显改善AKI的微环境通过降低ROS水平。同时CSCI水凝胶可以改善移植的ADMSCs在肾脏内的滞留和存活,而且CSCI水凝胶可以增强宿主肾脏细胞的增殖活力并减少细胞凋亡。ADMSC s复合CSCI水凝胶共同注射移植可以显著地增加微血管密度，并改善肾功能的恢复。
　　结论：使用温敏性CSCI水凝胶作为可注射性支架携带ADMSCs注射到肾脏区域可以解决细胞移植的主要障碍从而治疗急性肾损伤（AKI）。所以CSCI水凝胶是一个非常有潜力的细胞载体用于治疗AKI。

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前言

材料和方法

1 材料

2 实验方法

3 统计学分析

实 验 结 果

1. 大鼠ADMSCs的形态、表型特征、多项分化和慢病毒标记鉴定

2. CSCI水凝胶的细胞相容性检测

3. 大鼠缺血再灌注-AKI模型的构建

4. CSCI水凝胶对AKI的微环境影响

5. CSCI水凝胶与肾脏组织生物相容性检测

6. 活体生物发光成像（BLI）检测

7．肾功能检测

8. HE染色和组织学评分

9．微血管形成

10. ADMSCs在体内的分化

11. 体内细胞的增殖和凋亡检测

讨论

结论

参考文献

致谢

综述

参考文献