6-OHDA诱导的帕金森病大鼠模型脑中TNF-α、IL-6、NF-κB的改变

摘要

帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)为一种困扰许多中老年人的常见病,至今还没有一种有效的治疗方法能阻止该病的进展。近年来,随着对该疾病研究的深入,免疫炎症机制已成为研究PD发病机制的又一热点,一系列炎症反应因子,包括TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB等,均在PD患者的脑脊液中或受影响的脑区被发现有所改变。目前对帕金森病的应用基础研究多广泛采用6-OHDA诱导的PD大鼠模型,该模型是否能够模拟炎症过程,即其黑质多巴胺能神经元损伤过程是不是同样存在与人类患者相似的炎症过程,目前尚无明确证据。因此,本实验研究观察该模型中重要的炎症因子,TNF-α、IL-6、NF-κB水平的改变,为采用该模型研究PD的发病机制及治疗方法提供依据。
　　1、方法:
　　(1)取SD(SpragueDawley)大鼠,随机分成实验组与对照组,每组又分1,7,14,21d亚组,在实验组大鼠左侧纹状体内注射6-OHDA,对照组注射等量生理盐水;
　　(2)术后各时间点观察各亚组经阿朴吗啡(Apomorphine,APO)诱导后大鼠旋转行为的改变;
　　(3)术后各时间点各亚组取脑组织行免疫组织化学染色,观察黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元数量变化;
　　(4)术后各时间点各亚组用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠中脑黑质组织匀浆中TNF-α、IL-6的水平;
　　(5)术后各时间点各亚组行脑组织行免疫组织化学染色观察纹状体NF-κBp65的表达改变。
　　2、结果:
　　(1)成功构建6-OHDA诱导的PD大鼠模型;
　　(2)实验组大鼠术后7d出现不同程度向健侧缓慢旋转(3.25±0.76)次/分,14d旋转次数增多(8.42±1.25)次/分,21d达到高峰(11.98±2.52)次/分;对照组各时间点均未发现向健侧旋转;
　　(3)实验组注射侧黑质酪氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase,TH)阳性神经元数量1,7,14,21d组较对照组明显下降(P<0.01),且其数目的减少随时间延长而愈加显著,21d时下降到最低;
　　(4)实验组从6-OHDA注射后1d始到21dTNF-α、IL-6水平较对照组持续增高;
　　(5)实验组从6-OHDA注射后1d始到21dNF-κBp65的表达较对照组持续增强。
　　3、结论:
　　在6-OHDA诱导的帕金森病大鼠模型中炎症因子TNF-α、IL-6、NF-κB的表达升高,这种升高很可能参与脑黑质多巴胺能神经元的损伤过程。

目录

封面

声明

目录

英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

引言

材料与方法

一、材料

1、实验动物

2、主要试剂

3、主要仪器

二、实验方法与原理

1、实验分组

2、采用6-OHDA诱导的方法制备PD大鼠模型:

3、APO诱发旋转行为的检测

4、TH免疫组织化学检测

5、中脑黑质组织匀浆TNF-α、IL-6测定

6、NF-κBp65免疫组化检测

7．统计学处理

结果

1． APO诱发旋转

2.各组大鼠中脑黑质组织中TH阳性神经元的观察

3.各组大鼠左侧中脑黑质中TNF-α、IL-6含量的变化

4. 各组大鼠纹状体区NF-κBp65阳性神经元的观察

讨论

结论

参考文献

致谢

综述