siRNA干扰MafA基因对小鼠胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响

摘要

目的：（1）筛选干扰效果最佳的一对siRNA；（2）研究MafA对胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响；（3）探讨MafA与FoxO1相互之间的关系。
　　方法：（1）实时荧光定量PCR（Real Time PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）法分别检测siRNA干扰片段转染MIN6细胞后对MafA mRNA和蛋白的表达情况；（2）MTT法检测MIN6细胞在不同糖浓度培养下siRNA处理前后MIN6细胞的增殖情况；（3）Real Time PCR法检测MIN6细胞在不同糖浓度培养下siRNA处理前后MIN6细胞内FoxO1、PDX-1、insulin1和insulin2 mRNA的表达；（4）Western Blot法检测MIN6细胞在不同糖浓度培养下siRNA处理前后MIN6细胞内MafA、FoxO1、PDX-1蛋白的表达。
　　结果：（1）siMafA-2组与Cy3组相比，MafA mRNA和MafA蛋白表达均显著下降（P﹤0.05），说明siMafA-2组的s iRNA干扰效果最好。（2）不同糖浓度实验各亚组与对照组比较，MIN6细胞增殖均显著降低（P﹤0.05）。（3）25mmol/L糖浓度下实验组与对照组比较，FoxO1 mRNA表达显著降低（P﹤0.05）。（4）25mmol/L糖浓度下实验组与对照组比较，MafA、FoxO1和PDX-1蛋白表达均显著下降（P﹤0.05）；2.5 mmol/L糖浓度下实验组与对照组比较，FoxO1和 PDX-1蛋白表达均显著增加（P﹤0.05），而MafA蛋白表达差异无统计学意义（P﹥0.05）。（5）25mmol/L糖浓度下实验组与对照组比较，insulin2 mRNA表达显著降低(P﹤0.05）；2.5mmol/L糖浓度下，insulin2 mRNA表达差异无统计学意义（P﹥0.05）；不同糖浓度实验各亚组与对照组比较，insulin1 mRNA表达差异均无统计学意义（P﹥0.05）。
　　结论：（1）siRNA-2组的siRNA使MafA基因和蛋白表达均显著下降，是本实验中理想的siRNA；（2）MafA的下调可抑制小鼠胰岛β细胞的增殖；（3）MafA下调可直接抑制小鼠insulin2 mRNA表达，同时可通过FoxO1和PDX-1下调间接抑制小鼠insulin2 mRNA表达；（4）MafA可调节FoxO1和PDX-1的表达。

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前言

第一部分 不同片段siRNA对MIN6细胞MafA基因及蛋白表达的影响

1 材 料

2 方 法

3 结 果

4 讨 论

结论

第二部分不同糖浓度条件下siRNA沉默 MafA基因对小鼠胰岛β细胞增殖和胰岛素基因表达的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨 论

结论

参考文献

致谢

转录因子MafA的研究进展

参考文献