体外诱导近平滑、热带念珠菌对氟康唑、两性霉素B耐药分子机制研究

摘要

目的：检测近平滑念珠菌、热带念珠菌对FCZ、AMB的药物敏感性，体外诱导近平滑念珠菌、热带念珠菌的FCZ耐药株及AMB耐药株，并检测诱导的耐药株中耐药基因的表达情况，探讨其对FCZ、AMB耐药的分子机制。
　　方法：先以MTT微量液基稀释法检测近平滑念珠菌、热带念珠菌对FCZ、AMB的药物敏感性，再用FCZ、AMB浓度递增法体外诱导其耐药株,并用实时荧光定量PCR法检测野生株与耐药株耐药基因的表达水平。
　　结果：近平滑念珠菌、热带念珠菌的野生株有CYP51A、CYP51B、CDR1、CDR2、MDR1、MDR2、Yap1、Sho1mRNA低水平表达，而近平滑念珠菌、热带念珠菌的AMB耐药株中CYP51A、CYP51B、CDR1、CDR2、MDR1、MDR2、Yap1、Sho1基因的相对表达量明显上升，差异有统计学意义（P＜0.05）；近平滑念珠菌、热带念珠菌的FCZ耐药株中CYP51A、CDR1、CDR2、MDR1、Yap1、Sho1基因的相对表达量明显高于其野生株，差异有统计学意义（P＜0.05），而CYP51B、MDR2基因的表达量在近平滑念珠菌、热带念珠菌FCZ耐药株诱导形成过程中无明显变化（P>0.05）。
　　结论：CYP51A、CYP51B、CDR1、CDR2、MDR1、MDR2、Yap1、Sho1基因过度表达与近平滑念珠菌、热带念珠菌对AMB耐药有关；CYP51A、MDR1、CDR1、CDR2、Yap1、Shol基因的过表达与近平滑念珠菌、热带念珠菌对FCZ耐药有关，而近平滑念珠菌、热带念珠菌FCZ耐药株诱导形成过程中CYP51B、MDR2基因的表达量无明显变化。近平滑念珠菌、热带念珠菌长期接触FCZ、AMB后可诱导麦角固醇合成过程中的关键酶基因、外排泵基因及信号传导相关基因过表达，从而产生耐药性。

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前言

第一部分近平滑、热带念珠菌对氟康唑、两性霉素B的药敏性检测及体外诱导近平滑、热带念珠菌氟康唑、两性霉素B耐药株

材料与方法

1.1材料

1.2 方法

结果

2 .1药敏试验结果

2.2 近平滑、热带念珠菌的耐药程度

讨论

结论

第二部分 近平滑、热带念珠菌对氟康唑、两性霉素B耐药的分子机制研究

材料与方法

1.1材料

1.2方法

结果

2 . 1念珠菌野生株及耐药菌总RNA的提取

2 . 2耐药基因m RNA的表达情况

讨论

结论

全文总结

问题与展望

参考文献

致谢

真菌对唑类抗真菌药物的耐药机制的研究发展概况

参考文献