肿瘤M2型丙酮酸激酶(PKM2)在卵巢癌组织中的表达及在卵巢癌细胞中的作用研究

摘要

死亡率居于妇科恶性肿瘤之首的卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高居妇科恶性肿瘤的第三位，大部分患者首次就诊时已伴有腹腔内播散和远处转移[1]，但是卵巢癌发生、发展的分子机制尚未完全阐明。因此，深入探讨卵巢癌发生发展及侵袭转移的机制，对于卵巢癌的临床治疗与预后具有深远的意义。近年来，大量的研究发现：肿瘤M2型丙酮酸激酶(PKM2)的异常表达与多种类型恶性肿瘤的发生、发展密切相关，但PKM2是否参与了卵巢癌的发生、发展尚不清楚。因此，我们通过检测PKM2在卵巢癌组织中的表达状况、并通过过表达PKM2的卵巢癌细胞株，初步探究PKM2在卵巢癌细胞增殖和迁移中的作用，本研究的结果将为深入探讨卵巢癌的发生和发展机制奠定基础。
　　目的：
　　研究卵巢癌组织中是否存在 PKM2表达异常及其表达是否与患者临床病理参数存在关系。初步探讨并初步阐明 PKM2过表达对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。
　　方法：
　　（1）应用免疫组化技术检测卵巢癌组织样本中PKM2的表达状况，并分析PKM2的表达与卵巢癌患者临床病理参数之间的关系。
　　（2）通过构建表达PKM2特异性蛋白的慢病毒真核表达载体，获得PKM2过表达的慢病毒颗粒，用 PKM2过表达的慢病毒颗粒转导卵巢癌细胞，获得稳定的PKM2过表达的卵巢癌细胞株。
　　（3）以被空载体慢病毒颗粒转导的卵巢癌细胞为阴性对照，以未转导载体的卵巢癌细胞为空白对照，通过MTT和细胞划痕损伤试验分析PKM2过表达对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。
　　结果：
　　（1）免疫组化结果表明：114例石蜡包埋的浆液性卵巢癌样本与50例卵巢良性肿瘤周边正常组织样本比较，结果显示 PKM2在浆液性卵巢癌组织中过表达，过表达率为87.7％，且PKM2的过表达与卵巢癌患者的年龄、转移和TNM分期无关(p﹥0.05)，但与肿瘤大小相关(p＜0.05)。
　　（2）成功地构建了能够高效表达PKM2特异性蛋白的慢病毒真核表达载体，获得了高滴度的PKM2过表达的慢病毒颗粒，并将其转导入了SKOV3卵巢癌细胞中，使PKM2在SKOV3卵巢癌细胞株中过表达，并获得了稳定的PKM2过表达的SKOV3卵巢癌细胞株。
　　（3）MTT结果显示：与正常和转导空载体慢病毒颗粒的SKOV3卵巢癌细胞株相比，PKM2过表达的SKOV3细胞的增殖能力明显上调，P＜0.0001。
　　细胞划痕损伤实验的结果显示：PKM2过表达的SKOV3卵巢癌细胞迁移能力强于正常以及转导空载体慢病毒颗粒的SKOV3卵巢癌细胞株，差异具有统计学意义，P＜0.0001；
　　结论：
　　PKM2在卵巢癌组织中过表达，且PKM2的过表达与患者年龄、转移及TNM分期无关，与肿瘤大小相关。PKM2的过表达能促进卵巢癌细胞的增殖，且PKM2的过表达还能促进卵巢癌细胞的迁移。

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英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分从临床样本中初步探讨PKM2在卵巢癌组织中的表达情况

引言

材料和方法

结果

讨论

结论

第二部分PKM2基因重组慢病毒表达载体的构建及表达

引言

材料和方法

结果

讨论

结论

第三部分从细胞水平初步探讨PKM2对卵巢癌细胞功能的影响

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

总 结 论

参考文献

综述:PKM2对肿瘤细胞生物学行为的影响

致谢