饮食干预对NAFLD大鼠肝脏脂联素新型受体T-钙粘蛋白表达的影响

摘要

背景目的：非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是代谢综合征在肝脏的表现。脂联素是通过与其受体结合发挥抗炎、抗糖尿病、抗动脉粥样硬化作用的一种脂肪细胞因子。我们的前期研究结果发现NAFLD大鼠在从单纯性脂肪变进展到NASH（非酒精性脂肪性肝炎）过程中，肝脏脂联素表达下降。T-钙粘蛋白(T-cadherin)是脂联素的一个新型受体。本实验旨在研究脂联素新型受体 T-钙粘蛋白在NAFLD发病机制中的可能作用，并探讨饮食干预对T-钙粘蛋白表达的影响。
　　方法：将40只雄性SD大鼠适应性喂养1周后随机分为5组，分别为：8周正常饮食组（NC1组）、16周正常饮食组（NC2组）、8周高脂饮食组（HFD1组）、16周高脂饮食组（HFD2组）、饮食干预组（DIET组）。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清生化指标及血清脂联素水平，免疫组织化学法检测肝组织T-钙粘蛋白的蛋白表达水平，实时定量PCR（RT-qPCR）法检测肝组织T-钙粘蛋白mRNA表达水平。
　　结果：HFD1组大鼠肝脏NAS评分（非酒精性脂肪性肝病活动度评分）与NC1组相比明显升高（3.7±0.52 vs0.5±0.55，P<0.001）;HFD2组的大鼠肝脏NAS评分较NC2组明显升高（6.57±0.79 vs0.5±0.54，P<0.001）；随着高脂高能量饮食时间的延长，HFD2组大鼠比HFD1组大鼠肝脏组织NAS评分进一步升高，差异具有统计学意义（6.57±0.79 vs3.70±0.52，P<0.001）,反映了随着高脂高能量饮食时间延长，NAFLD的组织学进展过程。与HFD2组相比，饮食干预组大鼠肝组织的炎症反应（0.86±0.38 vs2.14±0.38）和脂肪变性（39.17±9.17 vs82.14±6.98）明显减轻，差异有统计学意义（P<0.001）。HFD1组与NC1组相比，肝组织的T-钙粘蛋白的蛋白表达(6.53±0.57 vs2.17±0.49，P<0.001)及mRNA表达水平(1.53±0.04 vs1.00±0.1，P<0.05)均增高。HFD2组与NC2组相比，肝组织的T-钙粘蛋白的蛋白表达(10.42±0.44 vs2.58±0.43，P<0.001)及mRNA表达水平(3.09±0.15 vs0.91±0.16，P<0.01)亦均明显升高。饮食干预组与HFD2组相比，肝脏T-钙粘蛋白的蛋白表达（4.05±0.56 vs10.42±0.44，P<0.001）和mRNA表达水平（1.38±0.04 vs3.09±0.15，P<0.01）降低。肝脏组织T-钙粘蛋白的免疫组化评分与肝脏组织的炎症等级（r=0.869，P<0.001）、气球样变程度（r=0.633，P<0.001）、脂肪变百分比均呈正相关（r=0.919，P<0.001）。
　　结论：应用高脂高能量饮食可成功建立大鼠NAFLD模型。NAFLD大鼠肝组织T-钙粘蛋白的表达升高，对NAFLD大鼠予以饮食干预后，肝组织T-钙粘蛋白表达下降。肝组织 T-钙粘蛋白的蛋白表达水平与肝组织的炎症分级、脂肪变程度均呈正相关，提示 T-钙粘蛋白可能在NAFLD的发病中起一定的作用。

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主要英文缩略词表

第一章 前言

第二章 材料与方法

2.1材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 动物饲养相关试剂及来源

2.1.3 试验主要试剂及来源

2.1.4 仪器设备BR680型酶标仪低温离心机

2.1.5 主要试剂配制方法

2.2 实验方法

2.2.1 动物模型的制备及分组

2.2.2 标本的采集

2.2.3 检测生化指标

2.2.4 血清脂联素浓度测定

2.2.5 空腹胰岛素浓度的测定

2.2.6 实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-qPCR）

2.2.7 肝脏组织学分析

2.2.9 统计学分析

第三章 结果与分析

3.1 大鼠体重、肝湿重及肝指数的变化

3.2 大鼠糖代谢及肝功能相关指标比较

3.3 大鼠脂代谢相关指标比较

3.4大鼠肝组织病理学改变

3.5 大鼠肝脏组织T-钙粘蛋白的蛋白表达情况

3.6 肝组织T-钙粘蛋白mRNA的表达

3.7 肝脏组织 T-钙粘蛋白的免疫组化评分与肝脏组织炎症分级、脂肪变百分比、气球样变程度的相关性分析。

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述:脂联素受体T-钙粘蛋白与非酒精性脂肪性肝病关系的研究进展

致谢

附录