基于蛋白质组学的肝细胞癌亚型的分子标志物筛选与临床验证

摘要

目的： 分析不同临床病理特征的HCC亚型的分子表型的特征，初步探讨其不同生物学特征的分子机制，筛选潜在的分子标志物并验证。 1.探讨影响HCC根治性切除术后不同时期复发/转移的临床病理因素； 2.比较不同肿瘤数目的HCC亚型的蛋白质组学的特征，初步了解不同肿瘤数目的 HCC亚型生物学行为差异的分子基础，寻找潜在的分子标志物并验证； 3.比较不同肿瘤大小的HCC亚型的蛋白质组学的特征，初步了解不同肿瘤大小的 HCC亚型生物学行为差异的分子基础，寻找潜在的分子标志物并验证； 4.探讨HK2表达情况与HCC根治性切除术后复发/转移的关系。 方法： 1.回顾性分析HCC患者根治性切除术后的复发/转移情况，以12项相关的临床病理因素为变量，进行单因素和多因素logistic回归分析，按不同复发/转移时期分析其影响因素。 2. iTRAQ标记的定量蛋白质组学的方法，比较单发性和多发性HCC的全体蛋白质组的特征，筛选差异表达蛋白，并应用生物信息学技术分析其分子功能、信号通路等；筛选出不同肿瘤数目的HCC亚型潜在的分子标志物并在mRNA和蛋白水平进行验证。 3. iTRAQ标记的定量蛋白质组学的方法，比较微小肝癌、小肝癌、大肝癌、巨大肝癌的全体蛋白质组的特征，筛选差异表达蛋白，并应用生物信息学技术分析其分子功能、信号通路等；筛选不同肿瘤大小的HCC亚型的潜在的分子标志物并在mRNA和蛋白水平进行验证。并对差异蛋白MT1G在HCC中的作用进行初步的分子机制的研究。 4.采用Western Blot检测差异表达蛋白HK2在HCC癌组织样本中的表达情况，并与HCC复发/转移的相关临床病理因素进行比较研究。回顾性分析HCC患者根治性切除术后的复发/转移情况，以临床病理因素和HK2表达情况为变量，进行单因素和多因素logistic回归分析，分析其影响因素。 结果： 1. HCC根治性切除术后12个月内复发/转移的独立危险因素为发现方式、术前血清AFP值、肿瘤大小和癌细胞分化程度；术后12～24个月复发/转移的独立危险因素为术前血清AFP值和肿瘤数目；术后>24个月复发/转移的独立危险因素为术前血清AFP值、肿瘤大小、肿瘤包膜完整性、癌细胞分化程度。 2.在多发性HCC（MC组）和单发性HCC（SC组）的癌组织中，与相应的癌旁组织（MN组和SN组）比较，分别鉴定出107种和330种差异蛋白。在MC组，差异蛋白主要集中在UBC信号通路和NFκB信号通路；而在SC组，差异蛋白主要集中于ERK信号通路和NFκB信号通路。HSD17B13只在MC组下调，而HK2只在SC组上调。 3.将癌组织和相应的癌旁组织相比较，在微小肝癌、小肝癌、大肝癌、巨大肝癌分别鉴定出88种、69种、118种和215种差异蛋白。在各个不同肿瘤大小的HCC亚型中，ERK1/2和AKT信号通路的变化在肿瘤发生、发展中均发挥了重要作用。在微小肝癌和巨大肝癌，发现了特有的信号通路的变化。确认了一组与HCC的肿瘤大小显著相关的差异蛋白。MT1G在HCC癌组织中表达降低，与肿瘤大小呈负相关，其过表达可以抑制HCC细胞增殖，促进细胞凋亡。 4. HK2表达情况与HCC的发现方式、镜下脉管癌栓、肿瘤大小、肿瘤数目相关。HK2高表达组术后累积生存率显著低于低表达组。HK2为HCC根治性切除术后复发/转移的独立危险因素。 结论： 1. HCC根治性切除术后不同时期复发/转移的影响因素不同。肿瘤数目和肿瘤大小是影响HCC术后不同时期复发/转移的独立危险因素。 2.不同肿瘤数目的HCC亚型有着不同的分子学特征和信号通路。筛选并鉴定出HSD17B13和HK2两种差异蛋白，可做为不同肿瘤数目的HCC亚型的潜在的分子标志物。 3.不同肿瘤大小的HCC亚型具有不同的分子学特征和信号通路。发现了与HCC的肿瘤大小密切相关的一组差异蛋白，可做为不同肿瘤大小HCC亚型的潜在的分子标志物。差异蛋白MT1G可能通过调节AKT信号通路抑制HCC的增殖。 4. HK2表达水平与HCC根治性切除术后的预后密切相关，可作为判断HCC复发/转移和预后的一个有效的分子标志物。

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前言

参考文献

第1部分肝细胞癌根治性切除术后不同时期复发/转移的相关临床病理因素分析

1 资料和方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

第2部分不同肿瘤数目的肝细胞癌亚型定量蛋白质组学比较研究

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

第3部分不同肿瘤大小的肝细胞癌亚型定量蛋白质组学比较研究

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

第4部分HK2在肝细胞癌中的表达与HCC术后复发/转移关系的研究

1 材料和方法

2 结 果

3 讨论

4 结论

参考文献

全文总结

综述:蛋白质组学在肝细胞癌复发/转移标志物筛选中的应用进展

致谢