6-羟基多巴胺诱导的帕金森模型大鼠眼组织镁离子转运体基因表达的研究

摘要

目的： 1、研究硫酸镁对6-OHDA诱导的PD模型大鼠的行为学的影响。 2、补充硫酸镁后6-OHDA诱导的PD模型大鼠眼组织镁离子转运体基因表达的变化。 3、补充硫酸镁后6-OHDA诱导的PD模型大鼠视网膜多巴胺能神经细胞的变化。 方法： 1、将8μg6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）注入正常清洁级大鼠右侧前脑内侧束（Medial forebrainbundle,MFB）毁损黑质纹状体多巴胺系统，建立偏侧帕金森疾病（Parkinson’s disease,PD）模型。 2、将大鼠分为四组：对照组、对照+MgSO4组、PD组、PD+MgSO4组。补镁组从建模术后30min开始，每天同一时间腹腔注射MgSO4?7H2O（90mg/kg），分别持续1W和2W。通过腹腔注射阿朴吗啡（Apomorphine，APO）诱导的旋转实验、Curling Test评价补镁后PD模型大鼠的行为学改变；通过酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）免疫组织化学染色了解眼球视网膜多巴胺能（Dopamine,DA）神经细胞的变化。 3、Q-PCR检测补镁1W和2W后，各组大鼠眼组织镁离子转运体SLC41A1、MagT1、CNNM2基因mRNA的表达变化。 结果： 1、APO诱导的大鼠旋转行为：补镁1W后，PD+MgSO4组大鼠的旋转圈数为（261±85）r/30min，与PD组的旋转圈数（309±109）r/30min相比差异无统计学意义。补镁2W后，PD+MgSO4组大鼠旋转圈数为（182±49）r/30 min，明显少于PD组（248±60）r/30min（p<0.01）。 2、Curling Test结果：补镁1W后PD组得分为16±2.6，明显高于对照组7.3±2.9( p<0.05)；PD+MgSO4组得分13±1.5，明显低于PD组(p<0.05)。补镁2W后PD组得分16±3.3，明显高于对照组4.3±1.5( p<0.01)；PD+MgSO4组得分11±3.8低于PD组(p<0.05)。 3、大鼠全血镁离子检测：补镁1W和2W后，对照+MgSO4、PD、PD+MgSO4组的全血镁离子浓度均明显低于对照组(p<0.05)。 4、Q-PCR结果：补镁1W后，PD组大鼠毁损同侧眼组织CNNM2、SLC41A1、MagT1基因 mRNA表达均明显低于对照组（p<0.01），PD组毁损对侧眼组织CNNM2、MagT1基因 mRNA表达也明显低于对照组（p<0.01），但 SLC41A1与对照组无显著差异。PD+MgSO4与PD组相比，毁损同侧CNNM2、SLC41A1、MagT1基因mRNA表达均明显增加（p<0.01），对侧CNNM2、MagT1基因mRNA表达也明显增加（p<0.01），而对侧SLC41A1基因mRNA表达无显著差异。对照+MgSO4和对照组相比，同侧CNNM2基因mRNA表达明显降低（p<0.05），对侧表达明显增加（p<0.05）；同侧SLC41A1基因mRNA表达差异无统计学意义，而对侧表达明显降低（p<0.05）；双侧眼组织 MagT1基因 mRNA表达均明显降低（p<0.05）。 补镁2W后，PD组同侧和对侧眼组织CNNM2、SLC41A1、MagT1基因mRNA表达均明显低于对照组（p<0.01）；PD+MgSO4组双侧眼组织CNNM2、SLC41A1、MagT1基因mRNA表达均明显高于PD组（p<0.01）。对照+MgSO4组与对照组相比，同侧CNNM2基因mRNA表达降低（p<0.05），对侧CNNM2基因表达差异无统计学意义；双侧眼组织SLC41A1基因mRNA表达均无统计学差异；对侧MagT1基因mRNA表达明显低于对照组（p<0.05），而同侧MagT1基因mRNA表达差异无统计学意义。 5、免疫组织化学染色检测视网膜TH表达：PD组双侧眼球视网膜内核层和内丛状层TH阳性蛋白表达强度明显低于对照组(p<0.05)。补镁1W和2W后，PD+MgSO4组双侧眼球TH阳性蛋白表达强度明显高于PD组(p<0.01)。 结论： 1、硫酸镁能改善6-OHDA诱导的PD模型大鼠的运动症状。 2、硫酸镁可上调PD大鼠眼组织镁离子转运体CNNM2、SLC41A1和MagT1基因的mRNA表达。 3、硫酸镁对 PD大鼠视网膜内丛状层和内核层的多巴胺神经元有一定的保护作用。 4、PD大鼠的全血Mg2+浓度降低。

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主要英文缩略词表

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前言

材 料 与 方 法

1、 实验材料

2、 方法

3 实验结果

3. 1 APO诱导的大鼠旋转行为

3.2Curling Test

3.3大鼠全血微量镁离子浓度

3. 4 Q-PCR检测CNNM2 、SLC41A1 及MagT1基因mRNA表达

3. 5 大鼠视网膜TH免疫组织染色

4、 讨论

4.1 PD模型大鼠的运动症状

4.2全血Mg2+浓度

4.3 眼组织CNNM2、SLC41A1、MagT1基因的表达

4.4 视网膜的DA能神经细胞

结论

参考文献

综述:帕金森病的镁治疗与视网膜

致谢