PTTG1基因启动子区CpG岛的甲基化状态在散发性结直肠癌中的检测及其临床意义

摘要

【目的】 亚磷酸盐测序法（BSP）检测40例散发型性结直肠癌患者肿瘤组织及瘤旁相对正常的肠粘膜组织 PTTG1基因启动子区 CpG岛甲基化率，蛋白质印迹法(Western Blot)及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PTTG1基因的表达情况，并进一步研究其与病理及临床特征之间的关系。 【方法】 40例散发性结直肠癌患者癌组织及癌旁相对正常的肠粘膜组织：亚磷酸盐测序法检测PTTG1基因启动子区CpG岛（-1～-400bp区域）的甲基化率；蛋白质印记法（WB）和实时荧光定量PCR( qRT-PCR)技术分别检测PTTG1蛋白和mRNA在癌组织及癌旁组织表达；分析其PTTG1基因的表达与病理学特征及临床关系。 【结果】 1.亚硫酸盐测序法（BSP）检测40例结直肠癌患者的癌组织及癌旁相对正常肠粘膜组织PTTG1基因启动子CpG岛（-1～-400bp区域）范围内共有32个可甲基化位点。其中肿瘤组织组甲基化率19.05±4.45,癌旁组为68.07±3.71,差异有统计意(P=0.032,P<0.05)。结直肠癌组织 PTTG1基因启动子区CpG岛的甲基化率低于癌旁组织，癌组织的甲基化率与肿瘤分化程度、浸润深度相关，与淋巴结转移、年龄、性别等因素无关； 2.免疫印记实验法（WB）检测40例结直肠癌患者的癌组织及癌旁相对正常肠粘膜组织中PTTG1蛋白表达量分别为2.79±0.23和1.00±0.17，差异有统计学意义(P<0.05)。直肠癌癌组织PTTG1蛋白高表达与癌旁组织，PTTG1蛋白在直肠癌组织的高表达与肿瘤的浸润深度、分化程度相关，与患者的年龄、性别以及肿瘤大小和淋巴转移等无关； 3.实时荧光定量PCR(qRT-PCR）检测40例结直肠癌患者的癌组织及癌旁相对正常肠粘膜组织中PTTG1 mRNA表达量的2-ΔΔCT值分别为18.38±2.14和9.37±1.49，差异有统计学意义(P=0.028，P<0.05)，显示结直肠癌组织中PTTG1 mRNA表达水平较癌旁组织升高。 【结论】 1. PTTG1启动子区内CpG岛(-1～-400bp区域)癌组织的甲基化率低于癌旁组织； 2. PTTG1基因在散发性结直肠癌组织中高表达，其与分化程度、浸润深度相关。可能为结直肠癌发病机制、诊断、治疗、预防提供新的思路。

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前言

第一部分 亚磷酸测序检测结直肠癌组织及癌旁组织 PTTG1启动子区CpG岛甲基化率

1 实验原理

2 材料与储存

3 实验方法和步骤

4 实验结果：

5 实验结果的计算

6 实验结果分析

7 结果讨论

第二部分免疫印迹及实时荧光定量PCR 检测结直肠癌组织及癌旁组织PTTG1表达情况

qRT-PCR 检测结直肠癌组织及癌旁组织PTTG1mRNA表达情况实验步骤和方法

Western Blot检测结直肠癌组织及癌旁组织PTTG1蛋白表达实验步骤和方法

第二部分讨论

全 文 结 论

参考文献

综述：DNA甲基化在肿瘤中的研究进展

致谢