碘伏对钛合金表面金葡菌细菌生物膜的抗菌活性的试验研究

摘要

【目的】 1、观察碘伏对浮游状态金黄色葡萄球菌的抗菌活性。2、通过激光共聚焦显微镜（CLSM）及扫描电镜（SEM）观察钛合金表面24小时金葡菌细菌生物膜结构。3、观察不同浓度的碘伏溶液对24小时细菌生物膜的体外抗菌活性，为临床上内植物相关感染的治疗方法提供参考。 【方法】 1、采用细菌悬液定量杀灭实验，观察碘伏对浮游状态金黄色葡萄球菌的抗菌活性。2、在钛合金盘表面构建24小时细菌生物膜模型，通过激光共聚焦显微镜及扫描电镜观察细菌生物膜结构。3、将临床上使用的碘伏原液按比例稀释成不同的实验浓度，分别对细菌生物膜浸泡作用5min；然后经过冲洗、超声振荡、涡旋振荡等操作后，采用表面涂布的活菌计数法，比较不同浓度碘伏对细菌生物膜的抗菌活性差异。4、使用碘伏原液对细菌生物膜浸泡作用10min，采用前述相同的计数方法观察碘伏的抗菌活性。 【结果】 1.实验室条件下，有效碘浓度为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%以及0.5%的碘伏溶液作用30秒均可全部杀灭浮游状态的金黄色葡萄球菌。2、将24小时细菌生物膜进行荧光染色后，置于激光共聚焦显微镜下，可以清晰的观察到大片细菌生物膜结构，细菌成团块或斑片状聚集，活细菌与死菌重叠部分呈现黄色斑块。三维立体结构图提示生物膜呈立体结构，有一定厚度，细菌聚焦成团，活菌和死菌相互包绕。扫描电镜下观察可见钛合金表面细菌聚集成团，菌体被粘液样物质包绕，形成浓厚的云雾样生物膜。3、经过碘伏浸泡作用5min后，同对照组相比，使用有效碘浓度为0.1%的碘伏作用后，钛合金盘上的活菌计数即减少约230倍；0.2%碘伏作用后细菌浓度进一步降低，与0.1%组差异有统计学意义。随着碘伏浓度增高到0.3%后，生物膜内的活菌计数开始出现大幅度下降，和对照组相比相差约10000倍。随着碘伏浓度的进一步升高到0.4%以及0.5%，钛合金盘上的CFU活菌计数进一步下降，0.3%组与0.5%组比较仍然具有统计学差异。4、碘伏原液对细菌生物膜浸泡作用10min后，CFU计数为0。 【结论】 实验室条件下，碘伏不仅对浮游状态金黄色葡萄球菌具有强大的抗菌活性，对钛合金表面的24小时金葡菌生物膜也具有抗菌活性，且随着碘伏浓度的增加抗菌活性增强。有效碘浓度为0.1%的碘伏即可对细菌生物膜内细菌产生明显的杀菌作用；而有效碘浓度为0.3%以上的碘伏可以进一步显著杀灭生物膜的细菌。当使用碘伏原液（即有效碘浓度为0.5%）对生物膜浸泡作用5min时，虽可杀灭生物膜内绝大部分细菌，但仍无法完全根除，而延长至10min时则可以全部将生物膜内的细菌杀灭。

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缩 略 词 表

前言

一、材料与方法

1. 主要实验试剂、材料和仪器：

2. 研究方法

二、结 果

1．悬液定量杀灭实验结果

2. 激光共聚焦显微镜下钛合金表面24小时细菌生物膜形态结构

3. 扫描电子显微镜下钛合金表面24小时细菌生物膜形态结构

4. 碘伏对生物膜内细菌抗菌活性的影响

三、讨 论

四、结 论

参考文献

综述:骨科内植物表面细菌生物膜破坏方法的研究进展

致谢