持续微量灌注神经胶质源性神经营养因子对帕金森模型大鼠的影响

摘要

目的： 研究持续微量给予神经胶质源性神经营养因子（glial-derived neurotrophic factor，GDNF）对帕金森氏病（Parkinson’s Diseases，PD）大鼠的旋转行为、以及中脑黑质多巴胺神经元产生影响；探讨GDNF对PD大鼠纹状体组织镁离子转运体MagT1和SLC41A1 mRNA表达量的变化、以及纹状体多巴胺转运体（Dopamine transporter，DAT）密度及功能的影响。 方法： 清洁级SD(Sprague-Dawley，SD)雄性大鼠分为9组：正常对照、对照/NS、对照/Mg、对照/NS+Mg、PD、PD/NS、PD/Mg、PD/GDNF和PD/GDNF+Mg组（每组各5只）。采用脑立体定位术，在右侧前脑内侧束（Medial forebram bundle，MFB）单点注射4?g6-OHDA建立PD大鼠模型。建模后2W，腹腔注射阿扑吗啡（Apomorphine，APO）诱导大鼠的旋转行为，并通过Alzet泵在右侧侧脑室（lateral ventricle，LV）给予GDNF/生理盐水(normal saline,NS)，在日常饮用水中补充3.6 g/L的MgSO4?7H2O，饲养4W。建模后6W经尾静脉注射99mTc-TRODAT-1标记DAT，运用小动物活体成像系统检测纹状体DAT密度及功能的变化；通过免疫组织化学了解中脑黑质多巴胺神经元的变化；通过q-PCR检测大鼠纹状体组织镁离子转运体MagT1和SLC41A1表达的差异性。 结果： 1、建模后2W，各组PD大鼠经APO诱导均出现向健侧的旋转行为，旋转圈数在160圈/30 min左右，PD组与各PD处理组间无统计学差异，但均明显高于对照组（p<0.001）。建模后6W，PD组与PD/NS组大鼠的旋转圈数均较2W时增加，但两组间的差异无统计学意义；而PD/Mg、PD/GDNF、PD/GDNF+Mg组的旋转圈数均较PD组明显下降，差异均具有统计学意义（p<0.05），其中PD/GDNF组和PD/GDNF+Mg组与PD组的差异尤为显著（p<0.01）。 2、PD组与PD/NS组中脑黑质毁损侧（右侧）TH阳性神经元数较对照组明显减少（p<0.01），但其两组间无统计学差异；PD/Mg组毁损侧 TH阳性神经元数较PD组有增加趋势，但差异无统计学意义；而PD/GDNF和PD/GDNF+Mg组毁损侧TH阳性神经元数均明显多于PD组（p<0.05）；PD/GDNF组与PD/GDNF+Mg组的健侧与毁损侧差异均无统计学意义。各实验组健侧TH阳性神经元数与对照组均无统计学差异；各对照处理组毁损侧TH阳性神经元数与对照组也无统计学差异。 3、建模后6W，对照组健侧与毁损侧的纹状体DAT放射性计数无统计学差异，而PD组双侧纹状体的 DAT放射性计数均明显低于对照组（健侧 p<0.05，毁损侧p<0.01）；PD/GDNF组双侧的DAT放射性计数均明显高于 PD组（p<0.01）；PD/GDNF+Mg组毁损侧也较明显高于PD组的毁损侧（p<0.05）。 4、建模后6W，对照组与各对照实验组间，大鼠纹状体组织健侧与毁损侧及组间SLC1A1和MagT1的mRNA表达量均无显著性差异；与对照组比较，PD组双侧SLC41A1和MagT1基因的mRNA表达量均显著性升高（p<0.01），尤以健侧为著；PD/NS与PD组比较，双侧均无明显差异，但均明显高于对照组（p<0.01）；PD/Mg组双侧SLC41A1的表达量较PD组明显升高（p<0.01），但MagT1基因的表达差异无统计学意义；PD/GDNF与PD/GDNF+Mg组双侧SLC41A1和MagT1基因的mRNA表达量均明显低于PD组（p<0.01）；但PD/GDNF与PD/GDNF+Mg组两者间比较，双侧均无明显差异。 结论： 1、GDNF可有效改善PD大鼠APO诱导的旋转行为，并对中脑黑质多巴胺神经元有一定的保护作用； 2、微量持续灌注泵的给药方式可以直达靶位以治疗PD，避免血脑屏障对药物吸收的影响，是一种较为安全、操作简洁、方便的手段； 3、GDNF与镁离子转运体的表达可能具有一定的相关性，可为后续GDNF的神经保护机制性研究提供新的方向。

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主要英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

材 料 与 方 法

1. 实验材料

2. 方法

结果

1. 脑立体定位侧脑室注射位点的确定

2. APO诱导的大鼠旋转行为

3. 免疫组化检测中脑黑质TH阳性细胞

4. 大鼠纹状体的 99mTc-TRODAT-1分布

5. RNA完整性

6. q-PCR检测SLC41A1和MagT1基因mRNA的表达

讨论

结论

参考文献

综述:帕金森病治疗研究进展

致谢