铁对肝纤维化的调节作用及铁转运的可能机制研究

摘要

目的： 通过建立的SD大鼠肝脏铁蓄积模型，验证该现象与肝纤维化发生之间的关系。并通过观察柠檬酸铁铵干预肝巨噬细胞的实验，验证铁蓄积现象发生的相关基因，初步探讨其作用机制。 方法： 右旋糖酐铁(iron dextran，ID)构建SD大鼠铁蓄积模型：将SD雄性大鼠60只按体重随机分为2组：对照组，右旋糖酐铁组。右旋糖酐铁50mg/kg后肢肌肉注射，1次/2天，持续时间为四个月、五个月和六个月，共三批次。每批次处死20只SD大鼠，每组10只，并观察测定每只大鼠体重、肝重、生化指标、肝纤维化四项指标，并进行肝脏病理学检测。 柠檬酸铁铵(ammonium ferric citrate，AFC)对RAW264.7巨噬细胞体外干预，分为4组：对照组、柠檬酸铁铵低、中、高剂量组。不同剂量柠檬酸铁铵(25μM、50μM、100μM)干预Raw264.7巨噬细胞24 h，分别用RT-PCR和Western Blot法检测细胞HIF-1α、FPN1和DMT1 mRNA及蛋白表达。 在HIF-1α抑制剂YC-1影响下，柠檬酸铁铵对RAW264.7巨噬细胞体外干预，分为5组：对照组、YC-1组、YC-1-AFC低剂量组、YC-1-AFC中剂量组、YC-1-AFC高剂量组。YC-1(100μM)单独干预以及YC-1(100μM)与柠檬酸铁铵低、中、高剂量(25μM、50μM、100μM)共同干预Raw264.7巨噬细胞24 h，分别用RT-PCR和Western Blot法检测细胞HIF-1α、FPN1和DMT1mRNA及蛋白表达。 结果： 与对照组比较，右旋糖酐铁组SD大鼠肝重指数显著升高，且生理生化指标显示肝损伤已经形成，出现急性肝炎，再结合肝纤四项指标推断，右旋糖酐铁注射SD大鼠可导致SD大鼠肝脏损伤，随着时间延长，出现肝脏铁蓄积明显，并伴随肝纤维化缓慢发生。 在柠檬酸铁铵对RAW264.7细胞体外干预实验中，HIF-1αmRNA表达各组间差异没有统计学意义(P＞0.05)；与对照组相比，AFC(100μM)组的FPN1 mRNA表达显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，而DMT1 mRNA表达显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。另外，HIF-1α蛋白表达各组间差异没有统计学意义(P＞0.05)；AFC(100μM)组与对照组、AFC(25μM)、AFC(50μM)组相比，FPN1蛋白表达升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)；AFC(100μM)组与对照组相比，DMT1蛋白表达降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)；AFC(50μM)、AFC(100μM)组与AFC(25μM)组相比，DMT1蛋白表达降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 在HIF-1α抑制剂YC-1影响下，与对照组相比，HIF-1α、FPN1、DMT1 mRNA表达均升高。其中，YC-1(100μM)组和YC-1(100μM)-AFC(50μM)组HIF-1αmRNA表达升高，与对照组相比，差异具有统计学意义(P＜0.05)；YC-1(100μM)组和YC-1(100μM)-AFC(50μM)组、YC-1(100μM)-AFC(100μM)组的FPN1 mRNA表达升高，与对照组相比，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与对照组相比，所有实验组的DMT1 mRNA表达升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。然而，所有实验组HIF-1α、FPN1和DMT1蛋白表达均有所降低。与对照组相比，YC-1(100μM)-AFC(25μM)组、YC-1(100μM)-AFC(100μM)组HIF-1α蛋白表达降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与对照组相比，YC-1(100μM)组、YC-1(100μM)-AFC(50μM)组相比，YC-1(100μM)-AFC(100μM)组的FPN1蛋白表达降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与对照组相比，YC-1(100μM)组、YC-1(100μM)-AFC(25μM)组、YC-1(100μM)-AFC(100μM)组DMT1蛋白表达降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 结论： 右旋糖酐铁注射SD大鼠可导致肝纤维化的发生，且随时间推移肝损伤逐渐加重。柠檬酸铁铵干预肝巨噬细胞，HIF-1α表达改变无统计学意义，而 FPN1和DMT1表达改变验证了铁转运在细胞层次的发生。YC-1与柠檬酸铁铵共同干预后，抑制了HIF-1α表达，相应的FPN1和DMT1表达也发生了改变，即铁转运降低，说明该条通路是影响肝巨噬细胞铁代谢的相关通路。

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引言

一、肝纤维化及有关研究进展

二、本研究立项依据

第一部分右旋糖酐铁对SD大鼠肝纤维化形成的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

第二部分柠檬酸铁铵对巨噬细胞作用效果及铁转运机制的探讨

1材料与方法

2结果

3讨论

第三部分YC-1作用下柠檬酸铁铵对巨噬细胞铁转运的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

致谢

综述:铁和缺氧对肝纤维化的影响