溃疡性结肠炎者粪便滤液对小鼠肠道炎症和内脏感觉的影响

摘要

目的：观察溃疡性结肠炎(UC)患者和葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎小鼠的粪便滤液对正常小鼠肠道炎症(细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α)、肠道紧密连接蛋白ZO-1和内脏敏感性(腹外斜肌肌电幅值、脊髓 SP、CGRP)的影响，探讨 UC粪便滤液对缓解期UC IBS-like症状的影响。
　　方法：
　　1.60只正常雄性C57BL/6小鼠，称重，按照体重，随机分成三大组：
　　①RP1组(Recipient1)：24只，作为接受灌肠动物，随机分成3组(每组8只)，即：A(Control,CON)组，用含10%无菌甘油的生理盐水灌肠；B(UC patients’ fecal supernatants,pFS)组，用UC患者粪便滤液灌肠；C(DSS-induced colitis mice’s fecal supernatants,cmFS)组，用DSS诱导结肠炎小鼠的粪便滤液灌肠，0.4ml/次，2次/天，隔天灌，共计12次。
　　②RP2组(Recipient2):14只，先予DSS诱导结肠炎小鼠的粪便滤液灌肠，0.4ml/次，2次/天，隔天灌，共计12次，然后按体重随机分成2组，每组各7只即D(NS)组，用生理盐水灌肠；E(FMT)组，用正常小鼠粪便滤液灌肠，0.4ml/次，2次/天，共计2次。
　　③DN组(Donor)：22只，其中15只用于制作 DSS诱导结肠炎动物模型，制作UC小鼠粪便滤液。另外7只作为正常小鼠，作为正常小鼠粪便滤液的供者。
　　2.收集2例新诊断的UC患者粪便样本，制作粪便滤液。
　　3. RP1、RP2组动物在规定时间点行结直肠扩张(CRD)后腹外斜肌肌电测定，然后处死动物，观察小鼠肠道病理学(HE染色)、结肠黏膜细胞因子(IL-6、IL-1β、TNF-α)浓度(ELISA法)；测定肠道上皮紧密连接蛋白ZO-1表达水平(免疫组化法)；测定脊髓SP、CGRP的表达(免疫组化法)。
　　结果：
　　1.UC粪便滤液(来自于UC患者和DSS诱导结肠炎小鼠)灌肠不影响正常小鼠肠道的组织学、以及结肠黏膜细胞因子(IL-6、IL-1β、TNF-α)表达。A组(CON)、B组(pFS)、C组(cmFS)结肠黏膜细胞因子水平(pg/ml)分别是：IL-6分别为80.29±15.36、77.35±8.87、91.84±10.16(P=0.054)；IL-1β分别为93.66±23.06、94.86±18.26、91.05±18.18(P=0.927)；TNF-α分别为393.15±60.57、337.76±75.73、404.65±74.38(P=0.153)。
　　2. UC粪便滤液灌肠可降低小鼠肠道紧密连接蛋白 ZO-1的表达：B(pFS)组(0.215±0.013，PAB=0.001)、C(cmFS)组（0.187±0.021, PAC=0.000）ZO-1的平均光密度明显低于 A(CON)组(0.311±0.035)。正常粪便滤液灌肠后即 E(FMT)组 ZO-1表达水平(0.210±0.012)比D(NS)组(0.173±0.008，P=0.001)高。
　　3.在CRD容积为0.04、0.06、0.08ml时，UC粪便滤液灌肠使腹外斜肌肌电幅(?v)升高：B(pFS)组腹外斜肌肌电幅值(14.91±2.38、21.88±3.51、40.77±4.00)、C(cmFS)组(13.25±3.96、26.62±4.28、39.07±5.03)明显高于A(CON)组(6.74±1.88、14.94±2.60、20.02±2.70，P值均＜0.05)。在CRD容积为0.06、0.08ml时，正常粪便滤液灌肠治疗可降低腹外斜肌肌电幅值：E(FMT)组腹外斜肌肌电幅值(16.19±1.83、20.01±2.58)低于D(NS)组(19.76±1.55、26.56±2.74，P0.06ml=0.029、P0.08ml=0.003)。4. UC粪便滤液灌肠后，可升高脊髓 SP、CGRP表达：B(pFS)组(0.094±0.009、0.096±0.014)、C(cmFS)组(0.095±0.008、0.097±0.006)的 SP和 CGRP的平均光密度明显高于A(CON)组(0.065±0.004、0.062±0.008，各P值均为0.000)。正常粪便滤液灌肠可降低脊髓 SP、CGRP的表达：E(FMT)组 SP、CGRP表达水平(0.075±0.006、0.077±0.005)低于D(NS)组(0.090±0.006、0.093±0.008，P值分别为0.000、0.004)。
　　5.各小鼠ZO-1与腹外斜肌肌电幅值呈负相关关系(P＜0.05)；SP、CGRP与腹外斜肌肌电幅值呈正相关关系(P＜0.05)。
　　结论：溃疡性结肠炎患者和DSS诱导结肠炎小鼠粪便滤液可导致正常小鼠肠道紧密连接蛋白ZO-1减少，腰骶髓SP、CGRP的表达水平上升，同时内脏感觉过敏；正常小鼠粪便滤液可改善内脏高敏感小鼠的肠道通透性、内脏感觉过敏。

目录

声明

英文缩略词与中英文对照表

前言

1 材料与方法

1.1 研究对象和研究材料

1.2 实验方法

2 结果

2.1 一般资料

2.2 结肠组织病理学

2.3 A、B、C组结肠黏膜细胞因子水平

2.4 粪便滤液对小鼠结肠上皮紧密连接蛋白ZO-1影响

2.5 内脏感觉敏感性测定结果

2.6 肠道紧密连接蛋白ZO-1、脊髓背角SP、CGRP与腹外斜肌肌电幅值相关性分析

3 讨论

3.1 DSS诱导结肠炎小鼠模型的建立

3.2 IBD肠道菌群与肠道炎症

3.3 IBD肠道菌群与肠道上皮通透性

3.4 IBD肠道菌群与内脏高敏感

3.5 肠道菌群、肠道上皮通透性与内脏高敏感

3.6 本实验对IBS-like症状治疗的启示

4 结论

参考文献

【综述】:miRNA调节炎症性肠病肠道稳态的研究进展

致谢