移植菌液pH值对粪便菌群移植治疗小鼠溃疡性结肠炎肠道黏膜免疫影响及机制研究

摘要

目的 研究移植菌液pH值对粪便菌群移植治疗溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道黏膜免疫的影响及芳香烃受体(AHR)信号通路在其中的可能作用机制.方法 ①将50只C57 BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、粪便菌群低pH值组、粪便菌群中pH值组和粪便菌群高pH值组,每组10只.除对照组外,其余组采用2％葡聚糖硫酸钠连续饮用7 d建立UC模型.造模后,粪便菌群低pH值组、中pH值组和高pH值组分别给予酸性、中性、碱性粪便滤液灌肠,对照组和模型组给予等量生理盐水灌肠,均2次/d,连续7 d.处死小鼠,ELISA法检测血浆中白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-17A(IL-17A)含量,PCR法检测结肠组织中IL-10、TGF-β1、IL-17A、AHR、CYP1A1 mRNA表达量,免疫组化法检测结肠组织中IL-10、TGF-β1、IL-17 A蛋白表达情况.②无菌分离C57 BL/6小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,体外诱导分化为调节性T细胞(Tregs)和辅助性T细胞17(Th17),培养5 d后分为2组,对照组常规培养,AHR激动剂组加入吲哚甲醇培养,培养5 d后,ELISA法检测Tregs细胞上清液中IL-10、TGF-β1和Th17细胞上清液中IL-17A含量,PCR法检测Tregs细胞上清液中IL-10、TGF-β1、CYP1 A1 mRNA和Th17细胞上清液中IL-17 A、CYP1 A1 mRNA表达量.结果 ①与对照组比较,模型组血浆中IL-10、TGF-β1含量和结肠组织中IL-10、TGF-β1、AHR、CYP1 A1 mRNA表达量均明显降低(P均<0.05),血浆中IL-17 A含量和结肠组织中IL-17 A mRNA表达量均明显升高(P均<0.05),结肠原位蛋白标记IL-10、TGF-β1、IL-17 A结果与mRNA表达一致;粪便菌群各组血浆中IL-10、TGF-β1含量和结肠组织中IL-10、TGF-β1、AHR、CYP1 A1 mRNA表达量均明显高于模型组(P均<0.05),血浆中IL-17 A含量和结肠组织中IL-17 A mRNA表达量均明显低于模型组(P均<0.05),粪便菌群中pH值组各指标改善最显著.②AHR激动剂组Tregs细胞上清液中IL-10、TGF-β1含量和IL-10、TGF-β1、CYP1 A1 mRNA表达量均明显高于对照组(P均<0.05);Th17细胞上清液中IL-17 A含量和IL-17 A mRNA表达量均明显低于对照组(P均<0.05),CYP1A1 mRNA表达量明显高于对照组(P<0.05).结论 粪便菌群移植能通过激活AHR信号通路调节结肠中Tregs和Th17的表达,改善肠道黏膜免疫功能,且其作用与移植菌液的pH值相关,中性pH值移植菌液作用更明显.