NCOA2激活Wnt信号通路导致胃癌发生和转移的机制

摘要

目的：
　　观察NCOA2基因在胃癌MKN-28和BGC-823细胞增殖、转移和侵袭的作用，并探讨其可能的相关机制。
　　方法：
　　1、运用免疫组织化学染色方法，比较 NCOA2基因与胃癌临床病理特征之间和在癌组织与正常组织之间表达的差异，为本研究的后续研究做好准备以及机制研究提供新的线索。
　　2、构建NCOA2靶点的慢病毒，干扰NCOA2基因的表达，构建稳转细胞。再应用Western Blotting技术检测稳转细胞与Wnt通路和EMT作用相关蛋白的表达情况。
　　3、应用平板克隆形成实验和CCK-8实验，探究干扰NCOA2的表达以后胃癌细胞增殖能力的变化；再通过转移侵袭试验探究干扰NCOA2的表达以后胃癌细胞转移和侵袭能力的变化。
　　4、对比抑制NCOA2表达前后，胃癌细胞凋亡能力的差异。
　　5、将干扰 NCOA2基因表达前后的稳转胃癌细胞，分别注入小鼠皮下和腹腔内，对比在活体上胃癌皮下和腹膜转移的差异。
　　结果：
　　1、免疫组化实验结果显示：通过对胃癌及癌旁组织进行免疫组织化学染色，我们发现NCOA2的表达不但在淋巴结转移、TNM分期和性别上存在差异，且差异有统计学意义（P<0.05），但是不与其他临床病理因素相关，包括年龄、肿瘤大小、远处转移等。
　　2、Western blotting结果显示：干扰NCOA2的表达以后，β-cat的表达明显降低，而E-cad的表达反而降低。继E-cad表达的降低，N-cad、Vim和Slug都的表达明显升高。
　　3、平板克隆形成和CCK-8实验结果显示：干扰NCOA2的表达后胃癌细胞的存活及增殖能力明显较正常表达NCOA2的胃癌细胞来的弱，且CCK-8实验所测得的OD值也存在明显差异，且差异有统计学意义（P<0.05）。
　　4、Transwell实验：干扰NCOA2的表达后，穿透小室膜的细胞数较正常表达NCOA2的胃癌细胞数目减少。紧接着我们对穿过小室膜的细胞进行计数，并对实验组与对照组进行T检验，比较结果显示其差异具有统计学意义（P＜0.05）。
　　5、细胞凋亡实验：干扰 NCOA2的表达后，胃癌细胞早期和中晚期凋亡的细胞数目明显增加。
　　6、动物实验：干扰NCOA2的表达后，实验组的MKN-28sh细胞在裸鼠腹腔内的种植瘤的数目较对照组的MKN-28nc细胞的少，且大小较小。对实验组和对照组在裸鼠腹腔内的种植瘤的数目进行T检验，比较结果显示其差异具有统计学意义（P＜0.05）。实验组的MKN-28sh细胞在裸鼠皮下的种植瘤的大小较对照组的MKN-28nc细胞的小。
　　结论：
　　1、NCOA2在胃癌患者中的阳性率高，且其表达不但与淋巴结转移、TNM分期有关，还和性别有关；
　　2、NCOA2基因的表达可以激活 Wnt通路，促进胃癌细胞发生上皮间质转化（EMT），促进肿瘤的增殖和转移；
　　3、无论在体外还是裸鼠体内，NCOA2不但可以促进人胃癌细胞增殖及生存能力，还可通过抑制凋亡、促进其转移和侵袭作用，增强细胞存活能力。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验试剂配制

3 实验方法

4 统计学分析

实验结果

1. NCOA2在胃癌组织中的表达高于正常组织

2.通过Western Blotting筛选出NCOA2表达较高的胃癌细胞系

3.NCOA2在胃癌细胞中激活Wnt/β-cat信号通路

4.NCOA2通过Wnt/β-cat信号通路的激活诱导细胞发生EMT

5．NCOA2促进胃癌细胞的增殖能力

6．NCOA2促进胃癌细胞的转移侵袭能力

7．NCOA2抑制胃癌细胞的凋亡

8. NCOA2促进胃癌细胞在动物模型皮下、腹膜扩散

讨论

结论

参考文献

致谢

综述：NCOA2在胃癌中诊断及治疗研究的意义与前景