肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1在皮肤中的功能研究

摘要

目的：本课题旨在通过皮肤组织特异性的小鼠敲除模型，在分子、细胞以及动物水平上深入地研究Pin1调控皮肤干细胞维持、增殖以及分化的功能，从而探索皮肤干细胞维持、激活以及皮肤生长发育的机理，并评估Pin1对皮肤癌的发生发展以及转移的影响。
　　方法：
　　1.免疫组织化学和免疫荧光染色观察Pin1在小鼠皮肤以及人皮肤癌组织中的具体定位情况。
　　2.利用皮肤组织Pin1特异性敲除小鼠观察Pin1对小鼠表皮分化发育，毛发生长以及皮肤癌发生发展的影响，原代细胞克隆形成实验观察Pin1对小鼠皮肤干细胞干性的影响。
　　3.免疫染色，Western blot及荧光定量PCR检测Pin1在小鼠不同毛发生长周期和皮肤癌中的表达情况。
　　4.SCC13和A431皮肤癌细胞系敲减Pin1，研究Pin1对皮肤癌细胞增殖、迁移、克隆形成及裸鼠成瘤能力的影响。
　　5.Western blot筛选Pin1调控的相关蛋白,寻找Pin1调控皮肤发育，伤口愈合以及皮肤癌发生发展等的相关蛋白和信号通路。
　　结果：
　　1.正常皮肤中，Pin1主要位于皮肤上皮以及毛囊所在区域。皮肤癌中，Pin1主要位于肿瘤干细胞所在区域。
　　2.Pin1敲除不影响小鼠皮肤表皮的分化发育，轻微的影响小鼠的毛发生长和皮肤干细胞干性，但显著的抑制了DMBA/TPA引起的皮肤癌的发生和发展。
　　3.Pin1的表达量在小鼠毛发的生长期升高，在静止期降低，并小鼠随着年龄的增长逐渐降低；相对于正常组织，Pin1在皮肤癌组织中表达上调。
　　4.敲减Pin1后的SCC13细胞在增殖，迁移以及裸鼠成瘤能力等各方面减弱；敲减Pin1显著的抑制A431细胞的裸鼠皮下成瘤能力。
　　5.Cox2可能作为Pin1的下游蛋白来调控皮肤癌的发生与发展。

目录

声明

英文略缩词

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

1. Pin1在皮肤中的定位

2. 上皮组织Pin1特异性敲除小鼠的验证

3. 条件性Pin1敲除小鼠的毛发生长周期无显著变化

4. Pin1不影响表皮基底层细胞的增殖

5. Pin1不影响表皮的分化

6. Pin1非人表皮永生化细胞Hacat增殖与迁移所必须

7. 体外敲减Pin1抑制鳞状表皮细胞癌细胞SCC13的增殖与迁移

8. Pin1是鳞状表皮细胞癌细胞SCC13致瘤的关键蛋白

9. Pin1调控鳞状表皮癌细胞A431的裸鼠皮下成瘤

10. Pin1敲减抑制致癌物质引起的皮肤鳞状细胞癌

11. Pin1在小鼠肿瘤干细胞所在区域上调表达。

12. Pin1作用于Cox2来调控皮肤肿瘤的发生与发展。

讨论

结论

参考文献

综述:皮肤伤口愈合的过程

攻读学位期间取得的研究成果

致谢