糖尿病大鼠角膜病变相关神经营养因子的变化

摘要

目的：通过建立糖尿病大鼠角膜病变模型，研究相关神经营养因子如睫状神经营养因子（CNTF）,神经生长因子（NGF）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在角膜组织中的表达，进一步探讨糖尿病角膜病变的发病机制。
　　方法：按随机数字表法将36只SD大鼠分为正常对照组（n=18）和糖尿病组（n=18），根据观察时间每一组分为8周（n=6）、10周（n=6）、12周（n=6）三个亚组。糖尿病组中，腹腔大剂量注射链脲佐菌素诱导Ⅰ型糖尿病动物模型；正常对照组用等量的柠檬酸缓冲液注射。模型构建成功后，每两周分别测糖尿病组及正常组血糖变化情况，用角膜知觉检测仪测量角膜知觉的敏感性；于造模后8周、10周、12周分别对糖尿病组和正常组大鼠眼球进行取材，应用HE染色检测大鼠角膜组织病理改变，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测大鼠角膜组织中CNTF、NGF和IGF-1随糖尿病病程的变化趋势。
　　结果：
　　1）糖尿病组大鼠血糖明显高于正常对照组，差异具有统计学意义（P<0.01）；糖尿病组的体重与造模前相比未见明显增加（P>0.05）。
　　2）糖尿病组的角膜知觉于前6周与正常对照组相比未见明显变化（P＞0.05）；随着糖尿病病程的延长，于第8周发现糖尿病组与对照组相比角膜知觉开始出现减退，差异具有统计学意义（均P<0.05）；并且糖尿病组8周与10周相比，10周与12周相比，差异均具有统计学意义（均P<0.05）。
　　3）角膜HE染色可见对照组大鼠角膜上皮细胞层数分明，排列紧密，基底膜完整，角膜上皮及基质均未见水肿；糖尿病组8周时，角膜上皮细胞排列轻度紊乱，上皮水肿；糖尿病组10周时，角膜上皮细胞形态异常，排列紊乱，角膜水肿；糖尿病组12周时，角膜上皮细胞稀疏，细胞层数较正常组明显减少，角膜水肿明显，部分上皮损伤脱失。
　　4)qRT- PCR检测结果发现糖尿病组与正常对照组相比， CNTF表达逐步下降（p<0.05），但角膜上皮出现原发损伤脱失时可反射性上升（p<0.05）；糖尿病组NGF于第8周无明显变化（p＞0.05），于第10周和12周出现明显的下降趋势（p<0.05）；而IGF-1糖尿病组与正常组相比在8周时略有升高（p<0.05），但随着糖尿病病程的发展，其表达量在10周及12周逐步下降（p<0.05）。
　　结论：相关神经营养因子CNTF,NGF,IGF-1在糖尿病角膜病变的发生发展中扮演重要作用，随着病程的发展，表达逐步降低，使角膜失去正常的营养供应而发生病理改变。

目录

声明

英文缩略语表

前言

材料和方法

1.材料

1.1研究对象：

1.2主要试剂：

1.3主要实验仪器及耗材

2. 实验方法：

2.1 实验动物分组

2.2 主要溶液、试剂的配制方法：

2.3 Ⅰ型糖尿病动物模型的建立及基本操作：

2.4 角膜知觉测量的基本步骤：

2.5 组织病理学HE的基本步骤

2.6 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CNTF、NGF和IGF-1的表达

2.7 统计学分析

结果

1. 1型糖尿病动物模型的建立及血糖、体重变化情况

1.1 模型建立

1.2 血糖变化

1.3 体重变化

2.角膜知觉测定结果：

3. HE染色观察角膜组织病理

4.实时荧光定量PCR测量CNTF,NGF和IGF-1在角膜中的表达量

讨论

1.糖尿病大鼠角膜病变模型的构建。

2. 糖尿病大鼠角膜知觉的变化及意义。

3.糖尿病大鼠角膜HE染色的变化及意义。

4.糖尿病大鼠角膜病变中NGF,IGF-1和CNTF的表达情况及其作用。

5. 研究的不足之处。

结论

参考文献

综述:糖尿病角膜病变治疗的新方法

致谢