宫内慢性缺氧对子代大鼠成年期胰岛功能的影响

摘要

目的：研究宫内慢性缺氧对子代大鼠成年期胰岛功能的影响，对其机制进行初步探讨。
　　方法：SD大鼠孕鼠20只随机平均分为正常对照组(NC组)和宫内慢性缺氧组(ICH组)。ICH组孕鼠于孕7天至2l天，置于含氧12±1％的低氧仓内行缺氧处理。每天分上下午两次缺氧，每次4小时直到孕21天为止。子代鼠于16周龄每窝随机选取雄鼠1只，手术取出胰腺后胰腺切片HE染色显微镜下观察胰岛形态，IPP图像分析软件测定胰岛面积；采用免疫组织化学法检测胰岛中胰岛素(Insulin)，葡萄糖激酶（GK），葡萄糖转运蛋白2（Glut2）表达。采用qRT-PCR检测Insulin/FoxO1/Pdx1/MafA mRNA水平。
　　结果：
　　1.两组子代大鼠生后不同时间点体质量比较，结果显示：ICH组新生子鼠生后12h内体质量显著低于NC组子鼠,且差异有统计学意义(t=23.221，P＜0.05)。两组子代大鼠生后16周体质量比较,差异无统计学意义(P＞0.05)
　　2.ICH组子代成年雄鼠胰岛形态不规则、细胞分布不均，胰岛面积较正常对照组减少（11904±1573μm2 vs15324±761μm2,P＜0.05）。
　　3.免疫组织化学染色显示ICH组子代成年雄鼠β细胞面积（0.85±0.10%vs1.13±0.05%,P＜0.05）、胰岛素表达（1.50±0.51 vs2.27±0.28,P＜0.05）、GK表达（3.15±0.19 vs5.47±0.33,P＜0.05）、Glut2表达（2.14±0.15 vs3.81±0.11, P＜0.05）均低于NC组。
　　4.qRT-PCR显示ICH组子代成年雄鼠FoxO1基因相对表达量与NC组无显著性差异（0.93±0.55，P＞0.05），Pdx-1基因相对表达量（1.96±0.32,P＜0.05）、MafA基因相对表达量（4.32±1.12,P＜0.05）、Insulin基因相对表达量（2.25±0.61,P＜0.05）均高于NC组。
　　结论：宫内慢性缺氧可引起子代雄性大鼠胰岛形态异常、胰岛面积和β细胞面积减少，胰腺β细胞功能下降，但是MafA/Pdx-1基因相对表达量明显增高。提示该条件下的胰腺可能存在损伤与修复同时并存的情况。

目录

声明

附录 英文缩略词表

前言

材料和方法

1 主要实验材料

1.1 实验动物

1.2 主要实验仪器和设备

1.3 主要实验试剂

2 实验方法

2.1 宫内慢性缺氧动物模型的建立及实验对象选择

2.2 常规病理及免疫组化检查

2.3 PCR

2.4 统计学方法

结果

1.宫内慢性缺氧动物模型

1.1 两组孕鼠动脉血气分析

1.2 两组子代大鼠不同时间体质量比较

2. 16周子代雄鼠胰岛形态及面积比较

3.胰岛免疫组化结果及分析

3.1 胰岛素免疫组化染色

3.2 GK免疫组化染色

3.3 Glut2免疫组化染色

4.胰腺基因表达水平改变结果及分析

4.1 总RNA的纯度和浓度测定

4.2 Real-time qPCR反应体系及反应条件的优化

4.3 利用优化的实时荧光定量PCR反应条件

讨论

结论

参考文献

综述:慢性宫内缺氧对胰岛细胞功能影响的研究进展

致谢