阿糖胞苷诱导白血病HL60细胞凋亡及其对bcl-2表达的影响

摘要

阿糖胞苷(Ara-C)是治疗急性白血病首选的和非常有效的化疗药物之一。不同剂量Ara-C治疗白血病的作用及其机制不完全相同，不同剂量Ara-C组成不同的治疗方案，丰富了急性白血病治疗的内涵，取得了令人振奋的治疗效果。Ara-C临床使用剂量相差数十倍，甚至数百倍，其临床用量分别为小剂量Ara-C20mg/m2/d，常规剂量100-150mg/m2/d，中剂量0.5-1.0g/m2/d，大剂量1.0-3.0g/m2/次，每日二次。小剂量Ara-C是近3-5年国内外用于诱导治疗难治性白血病或常规治疗无效的急性白血病及缓解后的巩固治疗。大剂量Ara-C用于对急性淋巴细胞和急非淋白血病缓解后的早期强化治疗及急非淋白血病的强化治疗。但国内外关于小剂量及大剂量Ara-C治疗白血病的机制研究报道较少，本文按limber公式：μg/ml=(60×D/5000)×2×103计算小剂量、常规剂量和大剂量Ara-C血药浓度分别为20、120和1500μg/ml，并以此作为实验浓度研究不同剂量Ara-C对HL60细胞凋亡的诱导作用及其对bcl-2表达的影响。并初步探讨了小剂量Ara-C与重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合应用对HL60细胞凋亡的影响。

目录

论文说明：中英文缩略词表

序言

第一部分：文献综述

1.白血病的发病机制

2.Ara-C治疗急性白血病的主要机理

2.1Ara-C通过抑制DNA聚合酶和干扰DNA合成起作用

2.2Ara-C与细胞周期的关系

2.3Ara-C的诱导分化作用

2.4Ara-C通过Caspase家族成员介导细胞凋亡

3.Ara-C的毒性反应

4.细胞凋亡与白血病的研究现状

4.1细胞凋亡与细胞坏死的研究

4.2细胞凋亡主要相关基因及其在白血病发病中的作用

5.造血细胞生长因子的调节作用

6.Ara-C诱导细胞凋亡和对bcl-2表达的研究意义

第二部分：不同剂量Ara-C对HL60细胞凋亡的影响

1.材料

2.实验方法

2.1RPMI-1640细胞培养液、PBS（pH7.4）的配制和Ara-C浓度的选择

2.2细胞培养

2.3细胞形态学的初步观察

2.4HL60细胞生长曲线的绘制

2.5MTT法分析Ara-C对HL60细胞的生长抑制作用

2.6HE染色观察Ara-C对HL60细胞形态学变化的影响

2.7应用透射电镜观察HL60细胞的超微结构变化

2.8应用流式细胞仪分析细胞周期时相分布

2.9流式细胞仪分析Ara-C对HL60细胞凋亡的影响

2.10DNA琼脂糖凝胶电泳

2.11统计学处理

3.结果与分析

3.1倒置显微镜下的细胞形态学观察

3.2HL60细胞生长曲线的绘制

3.3不同剂量Ara-C对HL60细胞的生长抑制作用

3.4HE染色观察细胞的形态学变化

3.5透射电镜观察HL60细胞超微结构的变化

3.6不同剂量Ara-C对HL60细胞周期时相分布的影响

3.7流式细胞仪分析Ara-C对HL60细胞凋亡的影响

3.8DNA琼脂糖凝胶电泳分析结果

第三部分：Ara-C与与重组人粒细胞集落刺激因子联合应用对HL60细胞凋亡的影响

1.材料

2.实验方法

2.1细胞分组

2.2Ara-C与G-CSF联合应用对HL60细胞的生长抑制作用

2.3Ara-C与G-CSF联合应用对HL60细胞凋亡的影响

2.4统计学处理

3.结果与分析

3.1Ara-C与G-CSF联合应用对HL60细胞的生长抑制作用

3.2Ara-C与G-CSF联合应用对HL60细胞凋亡的影响

第四部分：不同剂量Ara-C对HL60细胞bcl-2表达的影响

1.材料

2.实验方法

2.1应用免疫组化染色及结合MIVNT显微图像分析系统研究Ara-C对HL60细胞Bcl-2蛋白表达的影响

2.2应用流式细胞仪及结合免疫荧光标记法分析Ara-C对HL60细胞Bcl-2蛋白表达水平的变化

2.3应用逆转录及聚合酶链式反应(RT-PCR)技术研究Ara-C对HL60细胞bcl-2 mRNA表达水平的影响

2.4统计学处理

3.结果与分析

3.1免疫组化ABC法分析Ara-C对Bcl-2蛋白表达的影响

3.2流式细胞仪分析Bcl-2蛋白表达水平的变化

3.3Ara-C对HL60细胞bcl-2mRNA表达水平的影响

第五部分：讨论与小结

1.讨论

2.小结

参考文献

致谢