中华蜜蜂与意大利蜜蜂乙酰胆碱酯酶生物化学性质比较

摘要

本文以中华蜜蜂ApisceranaceranaFabricius和意大利蜜蜂ApismelliferaligusticaSpinola的成年工蜂为研究对象，系统比较了这两种蜜蜂乙酰胆碱酯酶(AChE)的一些生物化学特性及对抑制剂的敏感度，并对其进行了初步纯化。研究结果如下：1用正交设计试验方法研究了AChE酶浓度、底物(ATCh)浓度、反应体系的pH、反应温度、反应时间5个因素对意大利蜜蜂头部AChE活性的影响。2研究了中华蜜蜂和意大利蜜蜂AChE活性的体躯分布及头部AChE的亚细胞分布。3比较了两种蜜蜂头部AChE对底物的特异性。4抑制时间进程曲线反应出两种蜜蜂头部AChE对有机磷和氨基甲酸酯类抑制剂都很敏感，被抑制的趋势一致，即随着抑制时间的延长，两种蜜蜂头部AChE的抑制率均呈现上升趋势。5用PEG20000双水相萃取对蜜蜂头部AChE进行沉淀，纯化倍数达到5倍。继续用SephadexG-200对其进行初步纯化，纯化倍数达到3.1倍。

目录

文摘

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第一章引言

第一节乙酰胆碱酯酶研究概况

1.乙酰胆碱酯酶(AChE)的功能

2.胆碱酯酶及AChE的研究历史

3.AChE的分子型

4.AChE的组织分布

5.AChE的结构

6.AChE的基因结构

7.AChE的抑制剂及复能剂

第二节昆虫AChE的研究概况

1.昆虫AChE的基因结构

2.靶标酶AChE引起的昆虫抗药性

第三节中华蜜蜂与意大利蜜蜂研究概述

1.蜜蜂种的分布及东方蜜蜂和西方蜜蜂的生物学特性

2.蜜蜂的经济价值及农药对蜜蜂的影响

3.国内外对蜜蜂AChE的研究现状及对蜜蜂AChE研究的意义

4.结语

第二章正交试验法确定意大利蜜蜂头部AChE反应的最适条件

1材料和方法

1.1供试虫源

1.2化学试剂

1.3仪器设备

1.4 0.1 mol/L磷酸缓冲液的配制

1.5 0.4mmol/L DTNB试剂的配制

1.6考马斯亮兰G-250染色液的配制：

1.7酶液制备

1.8 AChE活性测定

1.9蛋白质含量测定

1.10正交设计

1.11蜜蜂头部AChE比活力的测定

2结果与分析

2.1蜜蜂头部AChE比活力的测定

2.2正交试验结果的极差分析

2.3正交试验结果的方差分析

2.4实验因素各水平间的多重比较

3讨论

第三章中华蜜蜂和意大利蜜蜂AChE生物化学性质的比较研究

第一节中华蜜蜂和意大利蜜蜂AChE的活性分布

1材料和方法

2结果与分析

3讨论

第二节中华蜜蜂和意大利蜜蜂头部AChE的底物特异性

1材料和方法

2结果与分析

3讨论

第三节中华蜜蜂和意大利蜜蜂头部AChE的抑制动力学研究

1材料和方法

2结果与分析

3讨论

第四章中华蜜蜂和意大利蜜蜂AChE分离纯化的初步研究

1材料和方法

1.1供试虫源

1.2化学试剂

1.3仪器设备

1.4纯化缓冲液的配制

1.5酶液制备

1.6 PEG分级沉淀

1.7层析柱参数

1.8层析柱装柱、上样及洗脱方法

1.9 AChE纯化方法

1.10 AChE活性测定方法

1.11蛋白质含量测定

2结果与分析

2.1 PEG双水相萃取

2.2 Sephadex G-200纯化结果

3讨论

第五章总结与讨论

参考文献

致谢