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两种药用植物对植物病毒及三种介体昆虫的生物活性

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独创性声明及论文使用授权的说明

1、前言

1.1植物病毒病的危害及防治现状

1.2植物病毒抑制物质的研究概况

1.2.1化学类抑制物质

1.2.2天然产物类抑制物质

1.3植物源抗病毒活性物质的研究进展

1.3.1植物源抗病毒活性物质类型

1.3.2作用方式及机制

1.3.3我国植物源抗病毒剂研究概况

1.3.4植物源抗病毒剂的开发及应用前景

1.4植物源抗病毒活性物质研究存在的问题及展望

1.5本研究目的、意义及主要技术路线

2、药用植物抗病毒活性的筛选

2.1材料与方法

2.1.1供试寄主、供试毒源及供试植物

2.1.2供试仪器和试剂

2.1.3植物提取物的制备

2.1.4 TMV的提纯

2.1.5提纯病毒的电镜观察及浓度计算

2.1.6 TMV抗血清的制备

2.1.7 TMV抗血清效价测定

2.1.8抗体适宜工作浓度测定

2.1.9抗病毒作用药用植物的筛选

2.2结果与分析

2.2.1提纯病毒的电镜观察

2.2.2提纯病毒的浓度

2.2.3抗血清的效价

2.2.4抗体的适宜工作浓度

2.2.5具有抑制病毒侵染作用药用植物的筛选

2.2.6具有抑制病毒增殖作用药用植物的筛选

2.3讨论

3、两种药用植物抗病毒生物活性的研究

3.1材料与方法

3.1.1供试寄主、供试毒源及供试植物

3.1.2供试仪器和试剂

3.1.3植物提取物的制备

3.1.4对TMV的生物活性测定

3.1.5对CMV、PVYN的生物活性测定

3.1.6对烟草花叶病的防治作用

3.2结果与分析

3.2.1对TMV的抑制作用

3.2.2对CMV、PVYN的抑制作用

3.2.3对烟草花叶病的防治作用

3.3讨论

4、两种药用植物抗病毒作用机制的研究

4.1材料与方法

4.1.1供试寄主、供试毒源及供试植物

4.1.2供试仪器和试剂

4.1.3植物提取物的制备

4.1.4对病毒粒体形态结构的影响

4.1.5透析处理对提取物抗病毒作用的影响

4.1.6对病毒核酸作用的测定

4.1.7对病毒外壳蛋白作用的测定

4.1.8喷施处理后寄主体内相关防御酶活性的测定

4.1.9对寄主叶绿素、丙二醛(MDA)含量及POD、PPO两种酶同工酶的影响

4.2结果与分析

4.2.1两种提取物对TMV粒体结构的影响

4.2.2透析处理后两种提取物的抗病毒作用

4.2.3两种提取物对TMV-RNA的作用

4.2.4两种提取物对TMV-CP的作用

4.2.5喷施处理后寄主酶活性的动态变化

4.2.6对寄主叶绿素含量的影响

4.2.7对寄主丙二醛(MDA)含量的影响

4.2.8对POD、PPO两种酶同工酶的影响

4.3讨论

5、两种药用植物抗病毒活性成分的提取与分离

5.1材料与方法

5.1.1供试寄主、供试毒源及供试植物

5.1.2供试仪器和试剂

5.1.3臭椿和鸦胆子化学成分的系统预试

5.1.4活性成分的提取、分离及结构鉴定

5.2结果与分析

5.2.1化学成分的系统预试结果

5.2.2臭椿活性成分的提取、分离及结构鉴定

5.2.3鸦胆子活性成分的提取、分离及结构鉴定

5.2.4活性成分的抗病毒效果

5.3讨论

6、两种药用植物抗病毒活性物质提取条件、稳定性及剂型加工的初步研究

6.1材料与方法

6.1.1供试植物、供试毒源及供试植物

6.1.2供试仪器和试剂

6.1.3生物活性测定

6.1.4两种药用植物抗病毒活性物质提取条件的研究

6.1.5两种药用植物提取物稳定性试验

6.1.6臭椿提取物乳油剂型加工的初步研究

6.1.7鸦胆子提取物微乳剂剂型加工的初步研究

6.1.8两种植物源抗病毒剂的室内生物活性测定

6.2结果与分析

6.2.1两种药用植物抗病毒活性物质提取条件的确定

6.2.2两种药用植物提取物稳定性的测定结果

6.2.3臭椿乳油制剂的初步研制

6.2.4鸦胆子微乳剂的初步研制

6.2.5两种植物源抗病毒剂的室内生物活性测定结果

6.3讨论

7、两种药用植物对植物病毒介体昆虫的生物活性

7.1材料与方法

7.1.1供试植物、供试昆虫及统计软件

7.1.2植物提取物制备

7.1.3两种药用植物对蚜虫的生物活性

7.1.4两种药用植物对灰飞虱、褐飞虱的生物活性

7.2结果与分析

7.2.1对蚜虫的触杀作用

7.2.2对蚜虫的忌避作用

7.2.3对蚜虫的内吸作用

7.2.4对蚜虫的熏蒸作用

7.2.5对灰飞虱、褐飞虱的击倒作用

7.2.6对灰飞虱、褐飞虱的忌避作用

7.3讨论

总结

参考文献

附录1缩略语及含义

附录2所用主要试剂与缓冲液的配制

附录3攻博期间发表(投稿)的论文

致谢

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摘要

植物中活性成分丰富,从植物中寻找抗病毒活性物质为植物病毒病的防治提供了一条新途径。本文以烟草花叶病毒(TMV)为供试病毒,采用局部枯斑法和叶碟法对我国78科164种药用植物抗病毒活性进行了系统筛选。从中筛选出具有显著抑制TMV侵染和增殖的药用植物两种,即臭椿和鸦胆子,对两种药用植物的抗病毒生物活性、作用机制、有效成分进行了研究,并初步探讨了两种药用植物抗病毒活性物质提取条件、稳定性、剂型加工以及对植物病毒介体昆虫的生物活性。

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