芽孢杆菌（Bacillus sp.）的抑菌作用和抗菌蛋白基因TasA的克隆和表达

摘要

本研究以植物根际分离到的24株芽孢杆菌(Bacillussp.)菌株为对象，分别测定了其对植物病原真菌和细菌的拮抗效果，共筛选出12株对植物病原菌抑制率较高的菌株，它们分别为AB、V3、SAI、3-1、N8-b、V5、25-1、25-2、25-5、25-9、25-10、25-17。选择其中抑菌效果较好且稳定的几个菌株对香蕉炭疽病菌(Colletotrichummusae)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、香蕉枯萎病(Fusariumoxysporumf.sp.cubense)等病原菌的抑菌机理进行了研究，本论文重点研究了菌株25-1、25-17对香蕉炭疽病菌的作用机理：平板对峙培养出现明显的抑菌环；以凹玻片法，用两菌株培养滤液处理病原菌分生孢子，其孢子萌发率明显降低；将细菌培养滤液和孢子悬浮液涂布于PDA平板上，两菌株培养滤液均能抑制香蕉炭疽病菌分生孢子的形成。在普通光学显微镜和扫描电子显微镜观察显示，两菌株均可抑制香蕉炭疽病菌菌丝生长，造成菌丝分支增多，顶端和中央膨大，随着时间的延长畸变结构增加，菌丝呈念珠状或菌丝分支显著增多，且顶端细胞变形膨大聚集成簇，菌丝壁穿洞，内含物质泄漏，终使细胞崩解和消融，变成球状的空泡。　　以芽孢杆菌菌株25-17为材料，通过克隆测序获得其编码抑菌蛋白TasA的基因全长，利用网上BLASTn、DNAman和DNAclub等生物信息学软件对该基因进行结构分析。　　本研究构建了含TasA基因的融合蛋白原核表达载体pET-TasA，并在大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21中利用IPTG诱导成功地进行了表达，SDS-PAGE检测结果显示蛋白TasA获得了正确融合表达。

目录

独创性声明和论文使用授权的说明

前言

1生物防治的重要性

2生防微生物的应用

2.1微生物防治的发展

2.2微生物防治的优点和制剂种类

2.3微生物防治中生防细菌的应用

3芽孢杆菌在生物防治中的应用

3.1芽孢杆菌的特点

3.2芽孢杆菌的分类

3.3芽孢杆菌作为生防菌的应用

3.4芽孢杆菌的抑菌机理

4枯草芽孢杆菌的应用

4.1枯草芽孢杆菌生物防治的重要意义

4.2枯草芽孢杆菌的生防作用

4.3枯草芽孢杆菌的抑菌物质

4.4枯草芽孢杆菌的抑菌蛋白TasA

5抗菌蛋白基因的原核表达

6本研究的目的意义

第一章芽孢杆菌的筛选和作用机理

1.1材料和方法

1.1.1材料

1.1.2方法

1.2结果与分析

1.2.1芽孢杆菌拮抗真菌菌株的筛选

1.2.2芽孢杆菌对细菌的拮抗作用

1.2.2芽孢杆菌抑菌机理的研究

1.3结论和讨论

1.3.1拮抗菌的筛选

1.3.2室内平板拮抗作用与活体测试

1.3.3关于优良拮抗菌株混合培养的一点设想

1.3.4菌株25-1和25-17抑菌机理

1.3.5关于菌株25-1和25-17两菌株培养滤液的抑菌效果

第二章抗菌蛋白基因TasA的克隆与表达

2.1材料和方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果与分析

2.2.1 PCR方法初步鉴定菌株

2.2.2 TasA基因在大肠杆菌中的表达

2.3讨论

2.3.1关于TasA基因的克隆

2.3.2克隆条件的探索

2.3.3菌株的初步鉴定

2.3.4 TasA蛋白的表达

2.3.5研究工作展望

小结

参考文献

附录 攻读硕士学位期间撰写的论文

致谢