蜂胶的免疫增强作用及其在疫苗中的应用

摘要

蜂胶是一种具有免疫增强作用的天然物质。本文研究了不同极性溶剂，不同浓度乙醇，不同温度对蜂胶提取率的影响并制备了蜂胶免疫佐剂。本文选用山东本地ND和EDS-76分离株，将其纯化灭活后作为本试验抗原。将该抗原灭活后以一定比例与蜂胶佐剂按沈志强专有技术(know-how)制备鸡ND-EDS76二联蜂胶灭活疫苗。本文进行了该疫苗攻毒试验，测定了疫苗的最小免疫剂量、保护持续期、保存期。本文还进行了疫苗的免疫效力试验，并设有油佐剂组和空白对照组；该试验中采用血凝和血凝抑制试验以及淋巴细胞转化试验方法，对该疫苗免疫后鸡只的体液免疫和细胞免疫水平进行检测。各试验结果如下： 1．不同极性溶剂提取蜂胶所得蜂胶总黄酮含量不同，随着极性的升高，蜂胶总黄酮含量降低。根据溶剂的价格、食用安全性及回收率等因素，选择乙醇作为提取蜂胶的溶剂。当选择乙醇作为提取蜂胶的溶剂时，随着乙醇浓度的提高，上述有效成分的含量亦升高。温度对蜂胶提取率的影响幅度不如浓度那么显著，说明温度不是影响蜂胶提取率的主要因素。 2．本疫苗的攻毒试验结果显示，疫苗安全系数达到100％，最小免疫剂量为0.3ml/只；一次免疫的保护持续期可长达6个月以上：保存期试验结果显示，本疫苗在4℃～8℃保存1年后，保护率仍为100％，室温保存6个月后，保护率在92％以上。 3．经血凝和血凝抑制试验对该疫苗免疫后鸡只的体液免疫水平的检测发现，相对于油佐剂疫苗，该疫苗免疫后产生抗体时间更早，滴度更高，持续时间更长；同时，经淋巴细胞转化试验结果得知，蜂胶组的细胞免疫水平与油苗组、空白对照相比差异极显著，由此可见，蜂胶疫苗可增加脾淋巴细胞刺激原作用下的增殖能力。

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文摘

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论文说明：英文缩略语表

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第一章引言

1.1研究目的和意义

1.2国内外研究现状

1.2.1蜂胶的一般特性

1.2.2蜂胶的免疫增强作用

1.2.3蜂胶作为疫苗佐剂的研究

1.2.4 ND和EDS-76的病原学研究进展

1.2.5 ND和EDS-76的诊断和防治

1.3小结

第二章蜂胶免疫增强剂的制备

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.1.3高效液相色谱仪(HPLC)测定蜂胶总黄酮含量

2.2结果与分析

2.2.1不同极性溶剂对蜂胶提取的影响

2.2.2不同浓度乙醇提取对蜂胶提取的影响

2.2.3不同提取温度的影响

2.3小结与讨论

第三章ND-EDS蜂胶灭活疫苗的制备及攻毒保护试验

3.1试验材料

3.1.1材料

3.2方法和结果

3.2.1供免疫佐剂用的蜂胶质量标准

3.2.2疫苗研制

3.2.3疫苗的物理性状

3.2.4疫苗的超微结构观察

3.2.5疫苗的灭活性检验、无菌检验

3.2.6安全性检验、急性毒性检验

3.2.7最小免疫剂量测定

3.2.8免疫持续期测定

3.2.9疫苗保存期测定

3.3小结与讨论

第四章ND-EDS76二联蜂胶灭活疫苗免疫效力试验

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2方法

4.2结果及分析

4.2.1 PD50测定结果

4.2.2用NDHI抗体和EDS76 HI抗体测定产生坚强免疫力的时间

4.3小结与讨论

第五章结论

附图与说明

参考文献

致谢