小菜蛾对毒死蜱敏感性相关蛋白研究

摘要

随着蛋白质组学的兴起和发展，从蛋白质水平上研究昆虫抗药性的生理机制等方面已经逐渐成为热点。本研究利用蛋白质组学研究技术---双向电泳技术、MALDI-TOF-MS，探讨了不同龄期、不同品系小菜蛾药剂敏感性的相关蛋白，为今后从蛋白质水平上研究害虫抗性及为开发新农药寻找新的靶标位点奠定基础，同时也为小菜蛾的抗药性治理提供科学依据。主要研究结果如下： 1.不同龄期小菜蛾幼虫的蛋白表达 通过对小菜蛾2、3、4三个龄期的幼虫电泳图分别进行比对，共找到15个差异蛋白，其中7个蛋白是随着幼虫的生长发育上调表达的，7个蛋白是2龄幼虫没有，3、4龄幼虫中突现的蛋白。最后通过Mascot及NCBInr数据库的鉴定，有11个蛋白得到了很好的匹配，包括：转运H+ATP合酶d亚基、丝氨酸蛋白酶抑制剂Ⅱ、葡萄糖脱氢酶、谷草转氨酶Ⅰ、三酰甘油脂肪酶、磷酸甘油酸变位酶、Apolipophorin-Ⅲ、细胞色素氧化酶亚基Ⅰ、腺苷酸激酶Ⅰ、异戊二烯基二磷酸盐异构酶、核糖体蛋白L18。此外我们还对抗性品系的3、4龄幼虫进行了比对，发现了5个差异蛋白，其中1个蛋白是3龄独有的、2个在4龄中下调表达、2个在四龄中上调表达。通过Mascot及NCBInr数据库的鉴定，其中2个蛋白得到了很好的匹配，它们分别鉴定为电子转移黄素蛋白、翻译起始因子5A。 2.不同品系小菜蛾幼虫的蛋白表达 在毒死蜱抗性品系及敏感品系的3龄幼虫间找到了4个差异蛋白：2个蛋白是抗性品系独有的，2个蛋白是抗性中下调表达的；4龄幼虫间找到了8个差异蛋白：1个蛋白是抗性品系独有的，7个蛋白是在抗性中下调表达的。通过Mascot及NCBInr数据库的鉴定，其中有9个蛋白得到了很好的匹配，包括：抑制素WPH、肌动蛋白解聚因子、三磷酸甘油醛脱氢酶、二磷酸核苷酸激酶、异柠檬酸盐脱氢酶、磷酸甘油酸变位酶、葡萄糖脱氢酶。 上述大部分差异表达蛋白为昆虫代谢体系、免疫体系及转录、翻译的重要作用酶，推测与小菜蛾抗性形成有着密切的关系。

目录

文摘

英文文摘

声明

1前 言

1.1小菜蛾的生物学特性

1.2小菜蛾抗药性的研究进展

1.3蛋白质组学研究的历史背景及发展

1.3.1蛋白质组技术的兴起与发展

1.3.2蛋白质组学研究的主要内容及方法

1.3.3蛋白质组学研究的特点与难点

1.4蛋白质组学的应用

1.4.1蛋白质组学在模式昆虫上的应用

1.4.2蛋白质组学在非模式昆虫上的应用

1.5本课题研究的内容和意义

2材料与方法

2.1材料

2.1.1供试昆虫

2.1.2主要仪器

2.1.3主要试剂及溶液

2.2方法

2.2.1毒死蜱对小菜蛾的毒力测定

2.2.2蛋白样品的预处理

2.2.3蛋白浓度的测定

2.2.4双向电泳、染色及扫描

2.2.5图谱分析、切点及酶解

2.2.6 MALDI-TOF-TOF鉴定与分析

3结果与分析

3.1毒死蜱对小菜蛾的致死中浓度

3.2不同龄期小菜蛾全蛋白的电泳图谱及差异点分析

3.2.1不同龄期小菜蛾幼虫的电泳结果

3.2.2差异点的质谱鉴定与分析

3.3不同品系小菜蛾全蛋白的电泳图谱及差异点分析

3.3.1不同品系小菜蛾幼虫的电泳结果

3.3.2差异点的质谱鉴定与分析

4总结与讨论

4.1小菜蛾药剂敏感性的探究

4.2蛋白样品的提取及双向电泳条件的优化

4.3小菜蛾不同龄期及毒死蜱影响下差异蛋白的生物学功能

5存在的问题和需要继续探索之处

参考文献

附录

致谢